二、水样的采集

测定生化需氧量的水样，采集时应充满并密封于瓶中。在0～4℃下进行保存。一般应在6小时内进行分析。若需要远距离转运，在任何情况下，贮存时间不应超过24小时。

三、水样预处理

(1)水样的pH值若超出6.5～7.5范围时，可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节pH近于7，但用量不要超过水样体积的0.5％。若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或酸进行中和。

(2)水样中含有铜、铅、锌、镉、铬、砷、氰等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或提高稀释倍数以减少毒物的浓度。

(3)含有少量游离氯的水样，一般放置1～2h，游离氯即可消失。对于游离氯在短时间不能消散的水样，可加入亚硫酸钠溶液除去。其加入量由下述方法决定：

取已中和好的水样100ml，加入(1+1)乙酸10ml，10％(m/V)碘化钾溶液1ml，混匀。以淀粉溶液为指示剂，用亚硫酸钠溶液滴定游离碘。由亚硫酸钠溶液消耗的体积，计算出水样中应加入亚硫酸钠溶液的量。

(4)从水温较低的水域或富营养化的湖泊中采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将水样迅速升温至20℃左右，在不使满瓶的情况下，充分振摇，并时时开塞放气，以赶出过饱和的溶解氧。

从水温较高的水域或废水排放口取得的水样，则应迅速使其冷却至20℃左右，并充分振摇，使与空气中氧分压接近平衡。

四、水样测定

1．不经稀释水样的测定

(1)溶解氧含量较高、有机物含量较少的地面水，可不经稀释，而直接以虹吸法，将约20℃的混匀水样转移入两个溶解氧瓶内，转移过程中应注意不使产生气泡。以同样的操作使两个溶解氧瓶充满水样后溢出少许，加塞。瓶内不应有气泡。

(2)其中一瓶随即测定溶解氧，另一瓶的瓶口进行水封后，放入培养箱中(图8-13),在20±1℃培养5d。在培养过程中注意添加封口水。从开始放入培养箱算起，经过五昼夜后，弃去封口水，测定剩余的溶解氧。

8-3 恒温培养箱

2．需经稀释水样的测定

(1)稀释倍数的确定：根据实践经验，提出下述计算方法，供稀释时参考。

①地表水：由测得的高锰酸盐指数与一定的系数的乘积，求得稀释倍数，见表8-4。

由高锰酸盐指数与一定系数的乘积求得的稀释倍数

②工业废水：由重铬酸钾法测得的COD值来确定。通常需做三个稀释比。

使用稀释水时，由COD值分别乘以系数0.075、0.15、0.225，即获得三个稀释倍数。

使用接手洲希释水时，则分别乘以0.075、0.15和0.25三个系数。

注意：CODcr值可在测定COD过程中，加热回流至60min时，用由校核试验的邻苯二甲酸氢钾溶液按COD测定相同操作步骤制备的标准色列进行估测。

③稀释操作

a.一般稀释法：

按照选定的稀释比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水(或接种稀释水)于1000mi量筒中，加入需要量的均匀水样，再引入稀释水(或接种稀释水)至800ml，用带胶版的玻棒小心上下搅匀。搅拌时勿使搅棒的胶版漏出水面，防止产生气泡。

按不经稀释水样的测定相同操作步骤，进行装瓶、测定当天溶解氧和培养5d后的溶解氧。

另取两个溶解氧瓶，用虹吸法装满稀释水(或接种稀释水)作为空白试验。测定5d前后的溶解氧。

b．直接稀释法：

直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。在已知两个容积相同(其差＜1m1)的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水(或接种稀释水)，再加入根据瓶容积和稀释比例计算出的水样量，然后用稀释水(或接种稀释水)使刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。其余操作与上述一般稀释法相同。

BOD₅测定中，一般采用叠氮化钠改良法测定溶解氧。如遇干扰物质，应根据具体情况采用其他方法。

五、数据处理

1．不经稀释直接培养的水样

BOD₅(mg/L)＝C₁-C₂

式中：C₁—水样在培养前的溶解氧浓度(mg/L);

C₂—水样经5d培养后，剩余溶解氧浓度(mg/L)。

2．经稀释后培养的水样

式中：B₁—稀释水(或接种稀释水)在培养前的溶解氧(mg/L);

B₂—稀释水(或接种稀释水)在培养后的溶解氧(mg/L);

f_l—稀释水(或接种稀释水)在培养液中所占比例；

f₂—水样在培养液中所占比例。

注意：f₁、f₂的计算：例如培养液的稀释比为3％，即3份水样，97份稀释水，则f₁＝0.97，f₂＝0.03。

相关链接：BOD₅的测定（一）