液相色谱按固定相形态分为液液色谱、液固色谱以及连续床固定相液相色谱几大类。通常所指的液相色谱是指液固色谱，其它几类液相色谱常被用于特殊的分离分析过程。

液相色谱同定相按化学组成可分为微粒硅胶、高分子微球和微粒多L碳等主要类型;按结构和形状分为薄壳型和全孔型，无定形和球型；按填料表面改性与否可分为吸附型和化学键合型；也可以按洗脱方式分为吸附、键合、离子交换和凝胶渗透等。

1．液液色谱固定相

液液色谱又称分配色谱。固定相由惰性载体上涂敷固定液制成。流动相与载体表面固定相的接触面积很大。固定相由固定液和载体构成，其表面积的大小决定了涂渍固定液的多少。可供选择的固定液很多，但许多固定液常被溶剂流动相所溶解，因此具有实用价值的固定液并不多。由于在液液色谱中流动相也影响分配，因此，常用的固定液只有的几种，如非极性的角鲨烷、中等极性的聚乙二醇β一400和强极性的β，β’-氧二丙腈等。在正相色谱中，载体上涂渍极性固定液，流动相采用非极性溶剂，反相色谱则相反。

液液色谱柱的一般寿命约4—6个月，对互溶性高的体系，柱寿命往往更短，因此限制了这种方法的应用，目前只有为了某些特殊目的或在特殊的情况下采用。

2．液固吸附色谱固定相

液固吸附色谱又称吸附色谱，固定相一般为硅胶、氧化铝等吸附剂。溶质在柱中吸附剂上不断进行吸附一解吸循环，由于不同的被测物在吸附剂上吸附作用的差异而获得分离。

在液固吸附色谱中，溶质和固定相存在两种特殊作用：①溶质和溶剂分子对吸附剂表面某一位置的竞争作用，这使得溶剂组成的改变引起分离情况发生很大变化；②溶质所带各种官能团与吸附剂表面相应的活性中心之间的相互作用，这种作用与溶质分子的几何形状有关，当官能团的位置与吸附中心相匹配时，作用较强，反之，则作用较弱。因而，不同异构体的相对吸附作用往往会有很大差异，因此，吸附色谱法分离异构体往往比其它色谱法更为优越。

以硅胶为基质的固体，能承受较高的压力，可应用于任何一种液相色谱方法。它可以作为液固吸附色谱的固定相，也可以作为液相色谱的担体，还可以用于化学键合相色谱的基质材料等，是一种应用最多的固定相填料。

3．化学键合固定相

化学键合固定相是借助于化学反应的方法将有机分子以共价键连接在色谱载体上制得的，可用于反相、正相、疏水作用色谱分离模式中，离子交换、空间排斥和手性分离色谱中也有应用。据统计，键合相色谱在高效液相色谱中的应用约占80％以上。

硅胶表面上存在足够的可反应硅醇基，再加上硅胶本身的强度好，孔结构和表面积易于控制，有较好的化学稳定性等诸多特点，因而成为各种化学键合相的理想基质。

化学键合固定相依材料、形状、粒度和孔结构的不同可有不同的分类。根据键合有机分子的结构，硅胶键合固定相可分为si—O—c键型(硅胶与醇类的反应产物)，Si一N键型(硅胶与胺类的反应产物)和si一O一si—C键型(硅胶与有机硅烷的反应产物)等几种类型。按键合有机硅烷的官能团结构，si一O一si—C键型键合相还可分为非极性、极性和离子交换键合相等几类。它们的性能取决于键合相的比表面积、孔径及黏度、键合表面的覆盖率、键合有机分子的结构与官能团性质、表面残余的硅胶基数目等。

极性键合相一般指键合有机分子中含有某种极性基团。和空白硅胶相比，这种极性键合相的表面上能量分布相对均匀，因而吸附活性也比一般的硅胶低，可以看成是一种改性的硅胶。常用于正相色谱法，即用比键合相本身极性小的流动相洗脱。最常用的固定相有氰基(一CN)、氨基(一NH₂)、二醇类(D1OL)等类型。

氰基键合相的分离选择性与硅胶相似，但因极性比硅胶弱，所以在相同流动相条件下的保留值较硅胶小，若要维持相似的保留值，可用极性更小的流动相洗脱。许多在硅胶上的分离可用氰基键合相完成。它的优点是在梯度洗脱或流动相组成改变时平衡快。由于键合过程中si一0H基被一CN基取代，因而固定相和溶质间的不可逆化学吸附或副反应减少。氰基键合相能与某些含有双键的化合物发生选择性相互作用，因而对双键异构体或含有不等量双键数的环状化合物有更好的分离能力。

氨基键合相的性质与硅胶有较大的差异。si—OH基呈酸性，而一NH2，呈碱性。所以当用于正相洗脱时表现有不同的选择性。一NH2基具有强的氢键结合能力，对某些多官能团化合物，如甾体、强心苷等，有较好的正相分离作用。在酸性介质中，这种键合相作为一种离子交换剂，可用于分离核苷酸。氨基可与糖类分子中的羟基发生选择性相互作用，因而当用乙腈一水做流动相时可以分离单糖、双糖和多糖，这已成为一种常规方法。此时从流动相角度看为反相，但从机理上讲为正相色谱，因为流动相中水含量的增加使保留值减小。

当化学键合的有机硅烷分子中带上固定的离子交换基团时，称为离子交换键合相。与一般的离子交换树脂相同，带磺酸基、羧酸基者为阳离子交换剂；带季铵基(一R₄N+)或氨基(一NH2)者为阴离子交换剂。硅胶基质离子交换键合相具有刚性强、耐压及没有树脂那种固有的溶胀和收缩现象等优点，因而可在同一根柱上按照分析对象的具体要求在较宽的范围内改变流动相的离子强度、pH值以及有机调节剂的种类和含量，不会对柱效能产生较大影响。再者，硅胶基质粒度细、均匀性好，表面传质过程快，因而柱效比离子交换树脂柱高。此外，离子交换键合相柱通常在室温下操作即可获得良好的分离，比树脂简单。

反相HPLC中使用的固定相，大多是各种烃基硅烷的化学键合硅胶。烷基链长可以是C2、C4、C6、C8、C16、C18和C22等，最常用的是C18又称ODS，即十八烷基硅烷键合硅胶。键合烷基的链长对键合相的样品负荷量、溶质的容量因子及其选择性有不同的影响，当烷基键合相表面浓度(μmol／m2)相同时，随着烷基链长增加，碳含量成比例增加，溶质的保留值增加。

短链烷基(C6、C8)硅烷，由于分子尺寸较小，与硅胶表面键合时可以有比长链烷基更高的覆盖度和较少的残余羟基，适合于极性样品或做离子抑制的样品的分析。长链烷基键合相有较高的碳含量和较好的疏水性，对各种类型的样品分子有较强的适应能力，从非极性的芳烃到氨基酸、肽、儿茶酚胺和许多药物的分析皆可适用。苯基键合相和短链烷基键合相性质类似，新发展的多环芳烃键合相与长链烷基相性质接近，较适合于芳香族化合物的分离。为适应蛋白质、酶等生物大分子分离的需要，一些键合有短链烷基(C3、C4)的大孔硅胶(20～40nm)键合相和非极性效应更好的含氟硅烷键合相也已发展起来。新型键合固定相的迅速发展为分析具体样品选用合适的固定相带来诸多便利。