1．进样系统

(1) HPLC进样系统的重要性和基本要求。

HPLC的进样系统非常重要，是引起色谱峰展宽的主要因素之一。HPLC的进样系统会直接影响色谱峰的峰形和分析测试结果的稳定性以及数据的准确度，它是HPLC制造者和使用者必须高度重视的关健问题之一。

对HPLC的进样系统的基本要求是：密封性好、死体积小、重复性好；还要求进样时对色谱系统的压力和流，变化很小。

HPLC对进样器的具体要求如下。

①设计者和使用者都应注意，现代HPLC一般应该采用优质自动进样器，要求进样器具有取样速度快(有些仪器进样时间仅17s),重复性好等特点。如果是采用手动进样，则使用者要特别注意采样的准确性(特别要注意排除气泡)、采样的程序(吸样后用滤纸吸去针头外部的样品溶液)、进样的手感(垂直或倾斜度的一致性)、进样的部位、轻重等。

②进样室温度要求可控。一般用帕尔帖冷却，温控范围4～100℃；所有HPLC的制造企业，应该重视温控系统的设计；使用人员应重视设置、调节现场的温度。

③特别要注意进样残留物的清洗(主要是清洗针头)。

如果没有洗针，若有残留物为0.07％，则会出现如图2-17所示色谱图。

图2-17 残留0.07％时的色谱图

如果使用者注意认真清洗针头，清洗针头后，进样残留物由前面的0.07％降到0.05％，结果非常好。残留0.05％时，分析测试结果的谱图由上述色谱图变成如图2-18所示色谱图。

图2-18 残留0.05％时的色谱图

(2) HPLC的进样分类。目前国内外HPLC的进样方式可粗略分为两种：手动进样和自动进样。

①手动进样。手动进样又可以分为隔膜进样、停泵进样、阀门进样三种。

第一种，隔膜进样。隔膜进样是用微量注射器把样品注射到与色谱柱紧密相连的进样头内，通过流动相带入色谱柱内。这种进样价格便宜，操作简便。但是不能在高压下使用，一般要求使用时用力在10MPa以下。同时，这种进样很容易吸附样品，而产生记忆效应。一般隔膜进样的重复性在1％左右。但是能够耐多种溶剂的隔膜不易找到，所以该进样法有一定局限性。

第二种，停泵进样。停泵进样是在停止高压泵工作的情况下，将事先用HPLC注射器抽取的样品，经橡胶进样隔板注射到色谱柱头。对于使用多种有机溶剂的正相色谱，应该使用亚硝基氟橡胶进样隔板；而对于水一醇体系流动相的反相色谱，可以使用硅橡胶进样隔板。一般情况下，当在色谱柱工作压力超过12MPa时，带压操作会产生流动相泄露，此时应该采用停泵进样。但是，停泵进样有可能产生隔板污染，所以容易产生鬼峰。同时，停泵进样后重新启动泵的时候，也可能产生鬼峰和保留时间不准。

第三种，阀门进样。阀门进样一般采用六通阀进样器，进样量由定量环确定。操作时一般先将进样器的手柄放在采样位置，这时，进样口只与定量环接通，处于常压状态。用采样体积大于定量环的微量注射器注入样品溶液，此时样品停留在定量环中，然后转动手柄到进样位置，使定量环接入输液管路，样品由高压泵流来的高压流动相带入色谱柱中。

根据作者的实践，手动进样要求操作者非常仔细、规范；包括每次取样量的多少(取样的重复性)，针头外面的附着样品的清除，手感的轻重缓急，入针时前后左右的倾斜角度等。如果不注意这些问题，就会使测试结果的RSD(重复性)变坏。不过，目前国内外的HPLC手动进样的仪器已经较少，绝大多数都是采用自动进样。

②自动进样。自动进样时，要求自动进样器具有操作简便、良好的重复性，使用寿命要长，具有耐酸耐碱性、便于维修等性能。下面介绍几种国产的优质自动进样器。

第一种，ARCUS5全自动进样器。我国上海伍丰公司的ARCUS5全自动进样器，可以说是目前国际上最好的自动进样器之一，很有代表性；它已经达到目前国内外的最高端自动进样器水平。上海伍丰公司的ARCUS5全自动进样器主要有以下特点。

第一，具有顶针保护装置，它可以保护进样针不被损坏；在进样针无法正常扎入样品瓶时，会自动停止，保护取样针免受损坏。

第二，在压瓶架未检测到样品瓶时，系统会根据操作者的指示，自动停止或者跳过此位2进入下一个取样位置。

第三，时刻监视管路状态，当取样针管路有堵塞现象时，能及时停止运行并报警，有效防止因管路堵塞产生不可预测的故障。

第四，为避免由于漏液导致的进样不准确及其他问题，系统加入了漏液判断装置，在检测到漏液时及时提醒。

第五，运行稳定，定位精确，可自由更换托盘。

第六，自动识别。自由搭配2mL，4mL或10mL规格样品。瓶的托盘，最高满足108位样品瓶，满足每日工作之需。