A. Primer指出：HPLC的紫外检测器的分析总误差为杂散光引起的误差和噪声引起的误差之和。总误差与吸光度误差的理论值关系如图3-1所示。

图3-1中，杂散光引起的误差曲线表明，随着吸光度值的增大，吸光度误差也增大(负方向)。吸光度值到达lAb、时，吸光度误差明显向负方向猛增。

图3-1中，噪声引起的误差曲线表明，随着吸光度值的减小，吸光度误差也增大(正方向)。吸光度值小到0.OlAbs时，误差明显向正方向猛增。

图3-1 总误差与吸光度误差的理论值关系

长期实践表明，HPLC等仪器分析测试的总误差不单是由杂散光引起的误差、噪声(含基线平直度)引起的误差组成，还有光谱带宽、波长准确度、试样配制和操作引起的误差等多种误差。HPLC的分析测试的总误差应是前处理、噪声、基线平直度、杂散光、光谱带宽、波长准确度、试样配制和操作引起的误差等多种误差的总和。

下面以HPLC的UVD为例，说明设计者、使用者如何估算自己设计或使用的仪器的分析误差(误差用吸光度Abs表示)。这种估算方法是作者在长期设计、使用H PLC的实践中总结出来的一种总误差的分析、估算方法。具体做法如下：

假设仪器单色器的杂散光为0.01％T；噪声为为±0.0004Abs；分析测试时取光谱带宽为2nm；则仪器分析的绝对误差的总量△A为

△A=△A_SL＋△A_N＋△A_SBW+△A_其他

即总绝对误差△A＝杂散光产生的误差+噪声(含基线平直度)产生的误差+光谱带宽产生的误差+其他误差(样品配制、前处理、仪器条件选择、操作等)。设测试时的实际读数为A_实 =0.60000Abs；试样的实际(理论)吸光度值或吸光度真值为A；则分析测试误差可计算如下：

①杂散光(SL)产生的理论相对误差为：0.00043Abs，查A_实=0.60000Abs时，SL与DA/A的关系表(李昌厚著，《紫外可见分光光度计》，北京：化学工业出版社，2005)可得到△A/A的值为0.00043，由此，可求出A的真值为0.60025Abs。

因为[(A-0.60000)/A]=0.00043(查A实；=0.60000Abs时，SL与△A/A的关系表可得到△A/A的值为0.00043)；所以可求出A的真值为0.60025Abs。

②求出杂散光引起的绝对误差为△A/A=0.00043；A=0.60025；所以杂散光引起的绝对误差为△A=0.00043×0.60025=0.00026Abs。

③噪声就是绝对误差，所以噪声引起的绝对误差为0.0008Abs。

④光谱带宽(SBW)为2nm时，由SBW产生的绝对误差为0.00039Abs。

⑤由杂散光、噪声(N)、SBW三者产生的总绝对误差为△A=△A_SL+△A_N+△A_SBW=0.00026+0.0008+0.00039=0.00145(Abs)；相对误差为0.00145/0.60023=0.0024(即0.24％)。

但此时还未考虑样品处理时的操作误差(即其他误差)。所以，总误差绝对值肯定大于0.00145Abs(±0.00073Abs)。相对误差也肯定大于0.24％。

但是，根据一般仪器给出的光度误差范围：测量值为0.5～1.0Abs时，测试误差为±0.004Abs(或0.008Abs)，而该分析测试数据的绝对误差小于±0.004Abs、相对误差也在1.0％以内，所以分析测试结果符合误差要求。

以上误差计算方法很简单、直观。仪器设计者或分析工作者只要根据自己估算或实际测试的数据，结合仪器的性能技术指标[杂散光、噪声(基线平直度)、光谱带宽等]，以及分析测试者在样品配制、处理、仪器操作等因素方面的误差，就能估算出仪器对某项分析工作的分析误差，这是一种很实用的误差计算方法。

长期实践证明：从仪器学的角度考虑，在HPLC仪器的设计中，一般把仪器的各个部件既看成一个单独的部分，又看成相关的部分，并对其各项性能技术指标提出明确的要求。例如，对电光系统的设计时，应从整机对电光系统发出的能量的总要求出发，同时考虑电光系统对后面部件的影响(又可说后面部件对电光系统的要求)。首先应搞清楚对电光系统的光通量(灯泡的功率)应该有多大、电源的漂移、纹波系数S_R、电流调整率S_I或电压调整率S_v应该为多少等。在此基础上进行灯泡选型、变压器设计(变压器设计很重要，否则仪器的电子学部分将吃不起负载)、电路设计等工作。

对光学系统的设计，首先要考虑仪器整机对它的输出能量(信号)大小的要求(它要求电光系统输出的能量或信号也必须认真考虑)，如何保证它传递的能量最大(损失的光能量最小)。因为光学元件有各种类型(透镜、反射镜、棱镜等)，它们都有能量损失问题。例如：光栅有类型问题、衍射效率问题、闪耀波长位置问题、波长响应范围问题、杂散光问题、几何尺寸问题等，单色器有狭缝的几何宽度(与光谱带宽SBW成正比)、几何高度，光学系统有像散、像弯曲、球差、彗差、色差问题等。对这些参数或技术指标都要进行仔细、严密的分析或计算。

相关链接：HPLC设计的基本方法（三）