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点样后的展开设备

发布时间:2014-07-07 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:572

与平面色谱展开方式相对应有不同的展开设备,常见的展开设备有以下几种。

1.上行展开室

将点样后的纸或薄层的底边置于盛有展开剂的直立型的多种规格的平底或双槽展开室中,展开剂由纸或薄层下端借毛细管作用上升至前沿。这种展开方式适合于含黏合剂的硬板,是平面色谱中最常用的展开设备。纸色谱用的上行展开室根据需要用不同规格的圆形标本或大试管自制。薄层色谱用的上行展开室有平底及双槽2种,且均有3种规格,即带有不锈钢或玻璃盖的20cm×20cm,20cm×lOcm,10cm×10cm展开室。

2.下行展开室

平面色谱法中的下行展开,多用于纸色谱法。纸色谱法下行展开装置的示意图,将点样后的滤纸悬放在展开剂槽中,用粗玻璃棒压纸以固定,展开室底部可放饱和滤纸用的溶剂,展开剂从上而下流动,因此除毛细管作用外还有重力作用,展速较上行法快。

3.水平展开室

目前水平展开的设备主要以CAMAG公司的几种装置为代表。水平展开还应包括圆心展开和反圆心展开等环形展开,此类展开使用特殊的展开装置。

4.全自动展开室

全自动展开室(ADC),适用于薄层板进行同一种展开剂的多次展开。其特点是实现了薄层色谱展开过程的自动化控制,展开的每个过程可以重复,大大提高了色谱展开的重现性。预饱和、展开方式、展距、干燥条件均可编程后在选定条件下自动进行展开;采用电荷耦合装置监测展开过程,在自动显示展开距离和时间的程序完成后,ADC会自动停止展开;色谱板选用冷风或热风干燥,而且安全地存放于展开室内,留待下步实验。通过对比实验证明,采用ADC展开的RF值、峰高和峰面积的RSD均优于常规展开室。

CAMAG公司提供了一种全自动多步展开室,除具有ADC展开室的优点外,其最大特点是,根据试验需要,可以由最多5种不同溶剂求出不同的梯度组合,对同一薄层板利用不同溶剂组合进行增量多次展开。全自动多步展开以微机预编程序,设计了一个展开剂极性很宽的梯度程序,展开剂极性由高到低,每次展距递增,每次展开前溶剂按要求混合后由泵送至展开室,展开后自动吹干溶剂并开始下一个程序。这样不仅每次展开后斑点得到浓集,增加了分离数,而且可以用给定程序在同一薄层上分离
极性相差较大的组分。CAMAG公司的全自动多步展开室AMDll。

全自动多步展开梯度溶剂先用强极性溶剂,然后逐步减小溶剂的极性。强极性溶剂的移动距离短,非极性溶剂移动距离逐步增加,在10一25步展开时每步增长的距离约为3mm,总展距为3一lOcm。甲醇、乙腈为常用的极性溶剂,二氯甲烷、二异丙醚或t一丁基甲基醚为中等极性溶剂,正己烷是最常用的非极性溶剂。用于全自动多步展开的溶剂必须能被真空干燥以及与系统中的溶剂成分有相似的移动特性(Kappa值)。

当自动多步展开使峰宽度浓集到只有1mm时,移动距离80 mm意味着至少分离数可达40个,这就使全自动多步展开可与加压展开相当。

5.加压展开室

加压展开室中重要的一种是超压薄层色谱仪(OPTLC)。超压薄层色谱仪包括主机和两个泵,溶剂传送泵,连接展开剂的进口阀可连续供展开剂至加压的薄层表面。此类仪器可进行一维、二维及连续展开;也可进行同一种展开剂或多步梯度展开,加压展开的优点是展速快、分离效率高、灵敏度高、重现性好,而且具有一般高效薄层板所不具备的展距与时间呈线性关系及分离效率(N值)随展距的加长而提高的特点。

6.旋转薄层色谱仪

旋转薄层色谱仪有两种类型:一种是美国Harrison的7924型Chromatotron仪及北京青云仪器厂生产的LBC—I型离心薄层色谱仪;另一种是日本日立公司生产的CLC型离心液相色谱制备仪。旋转展开时,薄层板是厚度为1~4 mm含有黏合剂的薄层,点样量根据层厚而定,一般为每lmm厚度点样O.5~2 ml,点样及洗脱液均靠泵输送。通常,为防止酸、碱对泵的腐蚀,展开剂采用中性为宜。

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