本法是平面色谱法中广泛应用的定位方法。用于纸色谱的显色剂一般都适用于薄层色谱，含有腐蚀性的显色剂不适用于纸色谱及含有机黏合剂的薄层的显色，有时喷显色剂后需加热，这也不适用于纸色谱。

1．显色方法

(1)喷雾显色

显色剂溶液以气溶胶形式均匀地喷洒在纸或薄层上。喷雾器可以是手动的或电动的。

(2)浸渍显色

挥去展开剂的薄层板，垂直地插入盛有展开剂的浸渍槽中，设定浸板及抽出速度，规定在显色剂中浸渍的时间。由于浸渍条件可以标准化，且薄层可以均匀地接触显色剂，因此对改善定量时的重现性极为有利。

(3)超压衍生化显色

超压衍生化(over一pressured derivatizaton，OPD)是在吸有显色剂的聚氨基甲酸酯泡沫海绵垫上，用手动或自动的方法使薄层与海绵垫接触，试剂便浸入薄层，除去压力时适量试剂重新吸附至海绵垫上，干燥后薄层背景均匀。

(4)蒸气显色

多数有机化合物吸附碘蒸气后显示不同程度的黄褐色斑点，这种反应有可逆及不可逆两种情况，前者在离开碘蒸气后，黄褐色斑点逐渐消退，并且不会改变化合物性质，且灵敏度也很高，故是定位时常用的简便方法；后者是由于化合物被碘蒸气氧化、脱氢增强了共轭体系，因此在紫外光下可以发出强烈而稳定的荧光，对定性及定量都非常有利，但在制备薄层时要注意被分离的化合物是否改变了原来的性质。

此外，挥发性的酸、碱，如硝酸、盐酸、浓氨水、二乙胺等蒸气也常用于显色。

(5)展层一显色法

如用含有茚三酮的正丁醇一乙醇一水做展层一显色剂，进行氨基酸的纸色谱分离，展毕取出纸条，烘干后即显示斑点，从而使展开和显色合而为一，简化了操作，显色也均匀。

2．显色试剂
显色试剂可分两类，检查一般有机化合物的通用显色剂和根据化合物的特殊官能团而设计的专属性显色剂。这两类显色剂在薄层色谱或纸色谱有关资料及手册上有详尽的记载。

还有一些通用显色剂：

①硫酸溶液 常用的有硫酸一水(1：1)溶液；硫酸一甲醇或乙醇(1：1)溶液；1.5mol硫酸溶液及O.5～1.5 mol／L硫酸铵溶液，喷后于11O℃烘烤15 min，不同有机化合物显不同颜色。

②O.5％碘的三氯甲烷溶液 对很多化合物显黄棕色。

③中性0.05％高锰酸钾溶液 易还原性化合物在淡红色背景上显黄色斑点。

④碱性高锰酸钾试剂 还原性化合物在淡红色背景上显黄色斑点。溶液I：1％高锰酸钾溶液；溶液Ⅱ：5％碳酸钠溶液；溶液I和溶液Ⅱ等量混合应用。

⑤酸性高锰酸钾试剂喷1．6％高锰酸钾浓硫酸溶液(溶解时注意防止爆炸)，喷后于180℃加热15～20min。

⑥酸性重铬酸钾试剂 喷5％重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150℃加热。

⑦5％磷钼酸乙醇溶液 喷后120℃加热，还原性化合物显蓝色，再用氨蒸气熏，背景变为无色。

⑧铁氰化钾一三氯化铁试剂 还原性物质显蓝色，再喷2 mol／L盐酸溶液，则蓝色加深。I：1％铁氰化钾溶液；溶液Ⅱ：2％三氯化铁溶液；临用前将溶液I和溶液Ⅱ等量混合。

⑨水 憎水性化合物在硅胶薄层上展开后，用水喷薄层板，对光观察，在半透明的薄层板上，显出白色不透明的斑点。这是一种非破坏性显色剂。