GB 5009.97-2016规定了食品中环己基氨基磺酸钠测定的三种方法，包括气相色谱法、液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱法。

(一)气相色谱法

气相色谱法适用于饮料类、蜜饯凉果、果丹类、话化类、带壳及脱壳熟制坚果与籽类、水果罐头、果酱、糕点、面包、饼干、冷冻饮品、果冻、复合调味料、腌渍蔬菜、腐乳等食品中环己基氨基磺酸钠的测定。气相色谱法不适用于白酒中该化合物的测定。

1.测定原理

食品中环己基氨基磺酸钠用水提取，在硫酸介质中与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱氢火焰离子化检测器进行分离及分析，保留时间定性，外标法定量。

2．试剂和仪器

(1)试剂

①正庚烷[CH₃(CH₂)₅CH₃]、氯化钠(NaCl)、石油醚：沸程为30～60℃。

②氢氧化钠(NaOH)溶液：40g/L。

③硫酸溶液：200g/L。

④亚铁氰化钾｛K₄[Fe(CN)₆]·3H₂O} 溶液：150g/L。称取折合15g亚铁氰化钾，溶于水并稀释至100mL，混匀。

⑤硫酸锌(ZnSO₄·7H₂O)溶液：300g/L。称取折合30g硫酸锌，溶于水并稀释至100 mL，混匀。

⑥亚硝酸钠(NaNO₂)溶液：50g/L。称取25g亚硝酸钠，溶于水并稀释至500mL,混匀。

⑦环己基氨基磺酸钠标准储备液(5.00mg/mL )：精确称取0.5612g环己基氨基磺酸钠标准品(纯度≥99%)，加水溶解并定容至100mL，此溶液1.00mL相当于环己基氨基磺酸5.00mg。置于1～4℃冰箱中保存，可保存12个月。

⑧环己基氨基磺酸钠标准使用液(1.00mg/mL )：准确移取20.0mL环己基氨基磺酸钠标准储备液用水稀释并定容至100mL。置于1～4℃冰箱中可保存6个月。

(2)仪器及设备

①气相色谱仪(配氢火焰离子化检测器)。

②涡旋混合器，离心机(转速)4000r/min)，超声波振荡器，样品粉碎机，10uL微量注射器，恒温水浴锅，天平(感量1 mg, 0.1mg)。

3.测定步骤

(1)取样及样品处理

①液体试样：普通液体试样：摇匀后称取25.0g试样(如需要可过滤)，用水定容至50mL备用。

含CO₂的试样：称取25.0g试样于烧杯中，60℃水浴加热30min以除去CO₂，放冷，用水定容至50mL备用。

含酒精的试样：称取25.0g试样于烧杯中，用NaOH溶液调至弱碱性pH 7～8, 60℃水浴加热30min以除去酒精，放冷，用水定容至50mL备用。

②固体、半固体试样：低脂、低蛋白样品(果酱、果冻、水果罐头、果丹类、蜜饯凉果类、浓缩果汁、面包、糕点、饼干、复合调味料、带壳熟制坚果和籽类、腌渍蔬菜等)：称取打碎、混匀的样品3.00～5.00g于50mL离心管中，加30mL水，振摇，超声提取20min,混匀，离心(3000r/min) 10min，过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液并定容至50mL，混匀备用。

高蛋白、高脂样品(酸乳、雪糕、冰淇淋等奶制品及豆制品、腐乳等)：冰棒、雪糕、冰淇淋等分别放置于250 mL烧杯中，待融化后搅匀，称取样品3.00～5.00g于50mL离心管中，加30mL水，超声提取20min，加2mL亚铁氰化钾溶液混匀，再加入2mL硫酸锌溶液，混匀，离心(3000r/min)10min，过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液并定容至50 mL ,混匀备用。

高脂样品(奶油制品、海鱼罐头、熟肉制品等)：称取打碎、混匀的样品3.00～5.00g于50mL离心管中，加入25 mL石油醚，振摇，超声提取3 min，再混匀，离心(1000r/min以上)10min，弃石油醚，再用25mL石油醚提取一次，弃石油醚，60℃水浴挥发除去石油醚，残渣加30mL水，混匀，超声提取20min，加2mL亚铁氰化钾溶液混匀，再加入2mL硫酸锌溶液，混匀，离心(3000r/min) 10min，过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液并定容至50mL,混匀备用。

(2)试样衍生化准确移取处理好的液体试样、固体、半固体试样溶液10.0mL于50mL带盖离心管中。离心管置试管架上冰浴5 min后，准确加入5.00mL正庚烷，再加入2.5 mL亚硝酸钠溶液，2.5 mL硫酸溶液，盖紧离心管盖，在冰浴中放置30min，期间振摇3～5次；加入2.5g氯化钠，盖上盖后置涡旋混合器上振荡1 min，低温离心(3000r/min )10min分层，或低温静置20min至澄清分层后取上清液，放置于1～4℃冰箱中保存备用。

(3)标准溶液系列的制备及衍生化准确移取1.00mg/mL环己基氨基磺酸钠标准溶液0.50、1.00、2.50、5.00、10.0、25.0mL于50mL容量瓶中，加水定容，配成标准溶液系列浓度为0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50mg/mL, 临用时配制以备衍生化。准确移取系列标准溶液10.0mL进行衍生化，方法同步骤(2)。

(4)色谱条件

①色谱柱：弱极性石英毛细管柱(内涂5％苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.53mm×1.0um)或等效柱。

②柱温升温程序：初温55℃保持3min, IOC/min升温至90℃保持0.5min, 20'C/min升温至200℃保持3min。

③进样口：温度230℃；进样量1uL，不分流/分流进样，分流比1:5(分流比及方式可根据色谱仪器条件调整)。

④检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，温度260℃。

⑤载气：高纯氮气，流量12.0mL/min，尾吹20mL/min。

⑥氢气：30mL/min；空气330mL/min(载气、氢气、空气流量大小可根据仪器条件进行调整)。

(5)测定方法分别吸取1uL经衍生化处理的标准系列浓度上清液，注入气相色谱仪中，测得不同浓度被测物的相应峰面积值，以浓度为横坐标，以环己醇亚硝酸酯和环己醇两峰面积之和为纵坐标，绘制标准曲线。

在完全相同的条件下进样1 uL经衍生化处理的试样待测液上清液，保留时间定性，测得峰面积，根据标准曲线得到样液中的组分浓度；试样上清液响应值若超出线性范围，应用正庚烷稀释后再进样分析，平行测定次数不少于两次。

4．结果计算

式中X—试样中环己基氨基磺酸的含量，g/kg;

P—由标准曲线计算出定容样液中环己基氨基磺酸的浓度，mg/mL ;

m—试样质量，g;

V—试样的最后定容体积，mL。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。精密度要求在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

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文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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