(三）液相色谱法-质谱/质谱法

液相色谱法-质谱/质谱法适用于白酒、葡萄酒、黄酒、料酒中环己基氨基磺酸钠的测定。

1.测定原理

酒样经水浴加热除去乙醇后以水定容，用液相色谱法-质谱/质谱仪测定其中的环己基氨基磺酸钠，外标法定量。

2．试剂及仪器

(1)试剂

①甲醇：色谱纯。

②乙酸铵溶液(10mmo1/L)：称取0.78g乙酸铵，用水溶解并稀释至1000 mL，摇匀后经0.22 um水相滤膜过滤备用。

③环己基氨基磺酸钠标准储备液(5.00mg/mL)：精确称取0.5612g环己基氨基磺酸钠标准品(纯度≥99%)，加水溶解并定容至100mL，此溶液1.00 mL相当于环己基氨基磺酸5.00mg。置于1～4℃冰箱中可保存12个月。

④环己基氨基磺酸钠标准中间液(1.00mg/mL)：准确移取20.0mL环己基氨基磺酸钠标准储备液用水稀释并定容至100 mL。置于1～4℃冰箱中可保存6个月。

⑤环己基氨基磺酸钠标准工作液(10 uL/mL)：用水将1.00mL标准中间液定容至100mL。放置于1～4℃冰箱中可保存1周。

⑥环己基氨基磺酸钠标准曲线系列工作液：分别吸取适量体积的标准工作液，用水稀释，配制成浓度分别为0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.0 uL/mL的系列标准工作溶液，使用前配制。

(2)仪器和设备

①液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾(ESI)离子源。

②分析天平：感量0.1mg, 0.1g。

③恒温水浴锅。

3.测定步骤

(1)试样溶液制备称取酒样10.0g置于50mL烧杯中，于60℃水浴上加热30min，残渣全部转移至100 mL容量瓶中，用水定容并摇匀，经0.22um水相微孔滤膜过滤后备用。

(2)色谱条件色谱柱：C₁₈ 柱，1.7um,100mm×2.1 mm (i.d)，或同等性能的色谱柱；流动相：甲醇、10mmol/L乙酸铵溶液；流速：0.25mL/min ;进样量：10 uL；柱温：35℃；梯度洗脱：洗脱条件如表3-2所示。

表3-2  梯度洗脱条件

(3)质谱操作条件

①离子源：电喷雾电离源(ESI)。

②扫描方式：多反应监测(MRM)扫描；质谱调谐参数优化至最佳条件，确保环己基氨基磺酸钠在正离子模式下的灵敏度达到最佳状态，并调节正、负模式下定性离子的相对丰度接近。

(4)标准曲线制作将配制好的标准系列溶液按照浓度由低到高的顺序进样测定，以环己基氨基磺酸钠定量离子的色谱峰面积对相应的浓度作图，得到标准曲线回归方程。

(5)定性测定在相同的试验条件下测定试样溶液，若试样溶液质量色谱图中环己基氨基磺酸钠的保留时间与标准溶液一致(变化范围在±2.5％以内)，且试样定性离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液中定性离子的相对丰度，其偏差不超过表3-3的规定，则可判定样品中存在环己基氨基磺酸钠。

表3-3 定性离子相对丰度的最大允许偏差

(6)定量测定将试样溶液注人液相色谱-质谱/质谱仪中，得到环己基氨基磺酸钠定量离子峰面积，根据标准曲线计算试样溶液中环己基氨基磺酸的浓度，平行测定次数不少于两次。

4．结果计算

式中X—试样中环己基氨基磺酸的含量，g/kg;

P—由标准曲线计算出试样溶液中环己基氨基磺酸的浓度，ug/mL;

V一试样的定容体积，mL;

m—试样质量，g。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。精密度要求在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

相关链接：食品中环己基氨基磺酸钠(甜蜜素)的测定（二）

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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