一、棉酚

棉酚是锦葵科植物棉花的根、茎和种子所含的一种黄色多元酚类有毒化合物。棉酚在棉花中的存在形式可分为游离型和结合型，两者之和即为总棉酚。棉酚在棉籽中含量为0.15％～1.8%，其中棉壳中含0.005％～0.01%，棉仁中含0.5％～2.5%。一般产生有害性的是游离棉酚，所以世界卫生组织(WHO)、联合国粮农组织(FAO)、联合国儿童基金会(UNICEF)规定供人食用的棉籽蛋白制品中游离棉酚(FGP )的含量不得超过0.06%,总棉酚(TGP)不得超过1.2％。如人长期食用含有超标棉酚的棉籽蛋白食品，会产生一系列蓄积性中毒反应。中毒症状为皮肤和胃灼烧、恶心、呕吐、腹泻、头痛，危急时下肢麻痹、昏迷、抽搐、便血，乃至因呼吸、循环系统衰竭而死亡等。

食品及饲料中棉酚的测定方法主要有可见分光光度法、紫外分光光度法及高压液相色谱法等。本实验介绍GB/T 17334-1998用HPLC测定食品中游离棉酚的方法。

(一)检测原理

将食品中的游离棉酚用有机溶液提取后，溶于无水乙醇中，用C₁₈柱将棉酚与杂质分开，在235 nm处测定。根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

(二)主要试剂及仪器

无水乙醇、无水乙醚、棉酚、磷酸均为分析纯，甲醇为HPLC色谱纯，普通氮气。

Agilent 1000高效液相色谱仪，KD-浓缩仪，离心机，100 uL微量注射器，Micropark -C₁₈(250mm,6mm)不锈钢色谱柱。

(三)检测步骤

1．样品中游离棉酚的提取

(1)植物油取油样1.000g，加入5 mL无水乙醇，剧烈振摇2min，静置分层，取上清液过滤，离心。

(2)水溶性样品取样品10.0mL于离心试管中，加入10 mL无水乙醚，振摇2min，静置5 min，取上层乙醚层，用氮气吹干，用1.0mL无水乙醇溶解，用0.45um微孔滤膜过滤。

2．标准曲线制备

(1)棉酚标准储备液及工作液的配制精密称取0.1000g棉酚纯品，用无水乙醚溶解，并定容至100 mL，为棉酚标准储备液(1.0mg/mL)。取棉酚储备液5.0mL于100mL容量瓶中，用无水乙醇定容至100 mL，为棉酚工作液(50ug/mL)。

(2)色谱分析条件柱温40℃；流动相，甲醇：磷酸水溶液=85：15;测定波长235nm；流量1.0mL/min；进样10uL。

(3)绘制标准曲线准确吸取2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL的棉酚工作液于10mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，进样10 uL，根据响应值绘制标准曲线。

(4)样品分析取10 uL样品溶液进行HPLC分析，根据保留时间确定游离棉酚，根据峰高从标准曲线上查出游离棉酚的含量。

(5)结果计算

X＝5p/m      (4-1)

式中X—样品中棉酚的含量，mg/kg ;

ρ—从标准曲线查出的游离棉酚的含量，ug/mL ;

m—样品质量，g。

(四)注意事项

(1)对油溶性样品用无水乙醇提取其中的游离棉酚，对水溶性产品则用无水乙醚提取。

(2)棉酚提取液及流动相均用0.45 um或0.2 um的微孔滤膜过滤。

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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