(二)水产品中甲基汞的液相色谱-原子荧光光谱联用方法测定

1．测定原理

食品中甲基汞经超声波辅助盐酸溶液提取后，使用C₁₈反相色谱柱分离，色谱流出液进入在线紫外消解系统，在紫外光照射下与强氧化剂过硫酸钾反应，甲基汞转变为无机汞。酸性环境下，无机汞与硼氢化钾在线反应生成汞蒸气，由原子荧光光谱仪测定。由保留时间定性，外标法峰面积定量。

2. 主要试剂和仪器

(1)主要试剂硼氢化钾(KBH₄)、过硫酸钾(K₂S₂O₈) , L-半胱氨酸[L-HSCH₂CH(NH₂)COOH]：分析纯；氯化汞(HgCl₂)及氯化甲基汞(HgCH₃Cl)标准品：纯度≥99%。

流动相(5％甲醇+0.06 mol/L乙酸铵+0.1 % L-半胱氨酸)、0.5g L-半胱氨酸和2.2g乙酸铵，置于500mL容量瓶中，用水溶解，再加入25 mL甲醇，最后用水定容至500mL。经0.45um有机系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气30min。现用现配。硼氢化钾溶液(2g/L) ; 2.0g硼氢化钾，用氢氧化钾溶液(5g/L)溶解并稀释至1000 mL，现用现配。过硫酸钾溶液(2g/L)：1.0g过硫酸钾，用氢氧化钾溶液(5g/L)溶解并稀释至500 mL，现用现配。甲醇溶液(1+1)：甲醇100 mL，加入100mL水中，混匀。

氯化汞标准储备液(200 ug/mL,以Hg计)：0.0270g氯化汞，用0.5g/L重铬酸钾的硝酸溶液溶解，并稀释、定容至100mL。于4℃冰箱中避光保存，可保存两年。

甲基汞标准储备液(200ug/mL，以Hg计)：0.0250g氯化甲基汞，加少量甲醇溶解，用甲醇溶液(1+1)稀释和定容至100mL。于4℃冰箱中避光保存，可保存两年。

混合标准使用液(1.00ug/mL，以Hg计)：0.50mL甲基汞标准储备液和0.50 mL氯化汞标准储备液，置于100 mL容量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀。现用现配。

(2)主要仪器与设备液相色谱一原子荧光光谱联用仪(LC-AFS)：由液相色谱仪(包括液相色谱泵和手动进样阀)、在线紫外消解系统及原子荧光光谱仪组成，组织匀浆器，离心机(最大转速10000r/mim)，超声清洗器等。

3．检测步骤

(1)样品处理样品预处理同上。取样品0.50～2.0g(精确至0.001g)，置于15 mL塑料离心管中，加入10mL的盐酸溶液(5mol/L)，放置过夜。室温下超声水浴提取60min,期间振摇数次。4℃下以8000r/mim转速离心15 min。准确吸取2.0mL上清液至5mL容量瓶或刻度试管中，逐滴加入氢氧化钠溶液(6mol/L)，使样液pH为2～7。加入0.1 mL的L-半胱氨酸溶液(10g/L)，最后用水定容至刻度。0.45 um有机系滤膜过滤，待测。同时做空白试验。

(2)仪器参考条件

①液相色谱检测条件：色谱柱C₁₈ 分析柱(柱长150mm，内径4.6mm，粒径5um)，C₁₈预柱(柱长10mm，内径4.6mm，粒径5um)。流速1.0mL/min。进样体积100 uL。

②原子荧光检测条件：负高压300V，汞灯电流30mA，原子化方式冷原子，载液10%盐酸溶液，载液流速4.0mL/min，还原剂2g/L硼氢化钾溶液，还原剂流速4.0mL/min，氧化剂2g/L过硫酸钾溶液，氧化剂流速1.6mL/min，载气流速500mL/min，辅助气流速600mL/min。

(3)标准曲线制作取5支10mL容量瓶，分别准确加入混合标准使用液(1.00ug/mL) 0.00、0.010、0.020、0.040、0.060、0.10mL，用流动相稀释至刻度。此标准系列溶液的浓度分别为0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、10.0ng/mL。吸取标准系列溶液100 uL进样，以标准系列溶液中目标化合物的浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

(4)样液测定将样液100 uL注入液相色谱-原子荧光光谱联用仪中，得到色谱图，以保留时间定性。以外标法峰面积定量。

(5)结果计算试样中甲基汞含量按下式计算：

式中X—样品中甲基汞的含量，mg/kg;

f—稀释因子；

P—经标准曲线得到的测定液中甲基汞的浓度，ng/mL;

P₀—经标准曲线得到的空白溶液中甲基汞的浓度，ng/mL;

V—加入提取试剂的体积，mL;

1000—换算系数；

m—试样称样量，g。

4．注意事项

(1)玻璃器皿均需以硝酸溶液(1+4)浸泡24h，用水反复冲洗，最后用去离子水冲洗干净。

(2)标准溶液物质可从经国家认证并授予标准物质证书的相关单位购置。

(3)在检测甲基汞样品处理时要注意缓慢逐滴加入氢氧化钠溶液，避免酸碱中和产生的热量来不及扩散，使温度很快升高，导致汞化合物挥发，造成测定值偏低。

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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