苏丹红又名“苏丹”(sedan)，为亲脂性偶氮化合物，主要包括苏丹红Ⅰ(1-苯基偶氮-2-萘酚)、苏丹红Ⅱ(1-[(2,4-二甲基苯)偶氮]-2-萘酚)、苏丹红Ⅲ(1-[4-(苯基偶氮)苯基]偶氮-2-萘酚)和苏丹红Ⅳ(1-2-甲基-4-[(2-甲基苯)偶氮]苯基偶氮-2-萘酚)等四种类型，苏丹红Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ均为苏丹红Ⅰ的化学衍生物，与苏丹红Ⅰ主体结构相同，均有致癌性，但具体结构间存在个别差异。

苏丹红的相对分子质量为248.29，黄色粉末状，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于油脂、矿物油、丙酮和苯。“苏丹红”并非食品添加剂，而是一种人工合成的红色染料，常作为一种工业染料，被广泛用于如溶剂、油、蜡、汽油的增色以及鞋、地板等增光方面。由于苏丹红价格低廉，一些不法商贩用其充当食品着色剂使用的现象时有发生。由于苏丹红的一些代谢产物可能是致癌物，因此应尽可能避免摄入这些物质。

苏丹红的测定方法主要有色谱法、质谱法、气谱-质谱联用法、光谱分析法、电化学分析法、酶联免疫吸附法、分子印迹技术等。其中GB/T 19681 - 2005《食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法》是卫生部发布的食品中可能违法添加的非食用物质黑名单中指定的分析方法。

(一)实验原理

样品经溶剂提取、固相萃取净化后，用反相高效液相色谱(紫外可见光检测器)进行色谱分析，采用外标法定量。

(二)试剂和仪器

1．试剂

(1)甲酸(分析纯)；乙醚(分析纯)；正己烷(分析纯)；无水硫酸钠(分析纯)；乙腈(色谱纯)；丙酮(色谱纯、分析纯)。

(2)层析柱管1 cm(内径)×5cm(高)的注射器管。

(3)层析用氧化铝(中性100～200目)105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL水降活，混匀后密封，放置12h后使用。

(4)氧化铝层析柱在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，轻敲实后加一薄层脱脂棉，用10 mL正己烷预淋洗，洗净柱中杂质后，备用。

(5)5％丙酮的正己烷液吸取50mL丙酮用正己烷定容至1L。

(6)标准物质苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ，纯度≥95%。

(7)标准储备液分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg(按实际含量折算)，用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。

2．仪器

高效液相色谱仪(配有紫外可见光检测器)；分析天平(感量0.1 mg)；旋转蒸发仪；均质机；离心机；0.45uL有机滤膜。

(三)实验步骤

1．样品处理

(1)红辣椒粉等粉状样品称取1～5g(准确至0.001g)样品于三角瓶中，加入10～30mL正己烷，超声5 min，过滤，用10mL正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5mL以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量
多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。控制氧化铝表层吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂质的多少用10～30mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5％丙酮的正己烷液60 mL洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45um有机滤膜过滤后待测。

(2)红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品称取0.5～2g(准确至0.001g)样品于小烧杯中，加入适量正己烷溶解(约1～10mL)，难溶解的样品可于正己烷中加温溶解。按(1)中“慢慢加入到氧化铝层析柱……过滤后待测”操作。

(3)辣椒酱、番茄沙司等含水量较高的样品称取10～20g(准确至0.01g)样品于离心管中，加10～20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品多加水，加入30mL正己烷：丙酮=3:1，匀浆5 min , 3000r/min离心10min，吸出正己烷层，于下层再加入20mL×2次正己烷匀浆，离心，合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并
保持5 min，用5 mL正己烷溶解残渣后，按(1)中“慢慢加入到氧化铝层析柱……过滤后待测”操作。

(4)香肠等肉制品称取粉碎样品10～20g(准确至0.01g)于三角瓶中，加入60mL正己烷充分匀浆5 min ,滤出清液，再以20mL×2次正己烷匀浆，过滤。合并3次滤液，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5 mL以下，按(1)中“慢慢加入到氧化铝层析柱中……过滤后待测”操作。

2．液相色谱参考条件

色谱柱：Zorbax SB-C₁₈(或相当型号色谱柱)；流动相：溶剂A—0.1％甲酸的水溶液：乙腈=85:15；溶剂B—0.1％甲酸的乙腈溶液：丙酮=80:20;梯度洗脱：流速：1mL/min，柱温：30℃，检测波长：苏丹红Ⅰ478 nm；苏丹红Ⅱ, Ⅳ520nm；于苏丹红Ⅰ出峰后切换，进样量：10uL:梯度洗脱条件如表6-2所示。

表6-2梯度洗脱条件

3．标准曲线绘制

吸取标准储备液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mL，用正己烷定容至25 mL，此标准系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、 1.28、2.56ug/mL，绘制标准曲线。

4．结果计算

按式(6-1)计算苏丹红含量

X=ρ×V/m   (6-1)

式中X—样品中苏丹红含量，mg/kg;

ρ—由标准曲线得出的样液中苏丹红的浓度，ug/mL;

V—样液定容体积，mL ;

m—样品质量，g。

(四)注意事项

不同厂家和不同批号氧化铝的活度有差异，须根据具体购置的氧化铝产品略作调整，活度的调整采用标准溶液过柱，将1ug/mL的苏丹红的混合标准溶液1mL加到柱中，用5%丙酮正己烷溶液60mL完全洗脱为准，4种苏丹红在层析柱上的流出顺序为苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅲ，可根据每种苏丹红的回收率作出判断。苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ的回收率较低表明氧化铝活性偏低，苏丹红Ⅲ的回收率偏低时表明活性偏高。

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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