玫瑰红B也称罗丹明B (Rhodamine B)，俗称花粉红，相对分子质量479.0175，结构式如图6-1所示，是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料，主要用于造纸工业染蜡光纸、打字纸、有光纸等。深红色结晶或红棕色粉末。溶于水及酒精中(呈带强荧光的蓝光红色溶液)，易溶于溶纤素，微溶于丙酮。遇浓硫酸呈黄光棕色，有强的绿色荧光，稀释后呈大红色转为蓝光红色和橙色。由于玫瑰红B具有脂溶性，曾被用作食品添加剂添加于调味品(主要是辣椒粉和辣椒油)起染色作用。一般成年人食用含有玫瑰红B的食物30min开始感觉头晕，心烦，小便呈淡玫瑰红色，皮肤黏膜也染成玫瑰红色，不痒。半数致死量(小鼠，腹腔)150mg/kg。

图6-1玫瑰红B

食品中玫瑰红B的测定方法有：液质联用法、高效液相色谱荧光检测法、高效液相色谱紫外检测法、试剂盒快速检测法等。本文介绍卫生部推荐方法液相色谱法。

(一)实验原理

试样中的目标化合物用乙腈：水(7:3)提取，用高效液相色谱C₁₈柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。

(二)试剂和仪器

1．试剂

(1)乙酸铵、无水乙酸为分析纯，甲醇、乙腈为色谱纯，试验用水均为超纯水。

(2)标准储备液的配制准确称取0.0100g酸性黄、酸性橙Ⅱ、碱性橙、碱性玫瑰精标准品于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇醇溶解并定容至刻度。

(3)标准使用液分别吸取1.0mL酸性黄、酸性橙Ⅱ、碱性橙、碱性玫瑰精的标准储备液到10mL容量瓶中用水定容至刻度为中间使用液，再分别取0.1、0.5、1.0、2.0、5.0mL中间使用液到1mL容量瓶中用水定容至刻度，四种组分的标准系列为：1、5、10、20、50ug/mL 。

(4)提取液乙腈：水= 7:3。

2．仪器

高效液相色谱仪，配备有Waters-Allains2695泵控及自动进样系统；Waters-2996二极管阵列检测器；离心机；超声振荡器。

(三)实验步骤

1．样品处理

准确称取2～5g样品于50mL塑料离心管中，加入10mL提取液，超声提取20min后，以1000r/min离心10min，取20uL液相色谱测定。

2．液相色谱参考条件

色谱柱：Inertsil ODS-3 4.6mm×250mm, 5 um；流动相：A：乙腈；B:10mm乙酸铵水溶液(乙酸0. 12%)；梯度洗脱：如表6-4所示；波长：酸性黄、酸性橙Ⅱ,碱性橙450nm ;碱性玫瑰精550nm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样体积：20uL。

表6-4梯度洗脱条件

3．结果计算

分别取标准和样品各20uL进样，HPLC测定，外标法定量。

按式(6-3)计算玫瑰红B含量

X＝ρ×10/m        (6-3)

式中X—样品中待测组分的含量，ug/g;

p—样品中待测组分的测定浓度，ug/mL ;

m—样品重量，g。

(四)注意事项

如果样品中色素干扰较多，可在氧化铝固相萃取小柱上分离。本办法对不同的色素可同时测定。

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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