依据标准：

《国家药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件(批准件编号：2006004)，药品名称：治疗肥胖症的中成药》

本文评定减肥胶囊(品名：俏妹牌减肥胶囊)中西布曲明含量(以盐酸西布曲明计)的测量不确定度。

1.1仪器与试剂及环境

对照品：盐酸西布曲明(缩写为SH，中国药品生物制品检定所，批号：100624-200401，含量：100％)；

高效液相色谱仪(Agilent 1200);

电子天平：型号Mettler Toledo XS205，测量范围0g～220g，实际分度值d=0.1mg,检定分度值e=10d=1mg，在本例中使用的量程，最大允许误差的绝对值MPEV=0.5e＝0.5mg；

单标线吸量管(A级，1mL)；单标线容量瓶(10mL，A级)；单标线容量瓶(100mL,A级)；

试剂：乙酸铵(分析纯)；乙酸(分析纯)；甲醇(色谱纯)；乙腈(色谱纯)；纯水。

室温：26℃。

1.2测定方法及程序

按国家药品监督管理局2006004号批准件的方法测定。含量测定按《中国药典》2010版(与《中国药典》(2015年版)四部“0512高效液相色谱法”)的方法(即：high performance liquid chromatogra-phy, HPLC)进行。本例根据实际情况采用标准曲线法，用不同浓度盐酸西布曲明系列标准溶液拟合“峰面积-盐酸西布曲明溶液浓度”标准曲线(本步骤从高效液相色谱仪复制积分峰面积读数至Excel中列表并自动生成回归方程)，从仪器读取减肥胶囊样品制备的供试品溶液(西布曲明)积分峰面积，从回归方程计算供试品溶液中西布曲明(以盐酸西布曲明计)的浓度，结合稀释倍数计算样品中盐酸西布曲明含量的测得值。

测量流程如图1所示。

图1 减肥胶囊中盐酸西布曲明含量测定流程

各步骤如下：

(1)用电子天平精密称取盐酸西布曲明对照品0.02017g，置20mL容量瓶(A级)中，用流动相[0.02mo1/L乙酸铵-0.1％乙酸/乙腈(20:80)，下同]稀释至刻度，摇匀，得盐酸西布曲明标准储备液(约0.001g/mL)20mL;

(2)精密量取上述溶液1 mL，置10ML量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含0.00018盐酸西布曲明的标准溶液①。依次精密量取标准溶液①各5mL，分别置10mL和20mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含盐酸西布曲明0.00005g和0.000025g的标准溶液②和③。标准溶液②和③各精密量取2mL，分别置10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度,摇匀，即得每1mL 含盐酸西布曲明0.000010g和0.000005g的标准溶液④和⑤。由上述过程，配制成五个不同浓度的系列标准溶液(浓度值见表1)。

(3)用配有DAD检测器(二极管阵列检测器)的高效液相色谱仪逐一测定盐酸西布曲明系列标准溶液的积分峰面积，每份测定两次，峰面积结果如表1，校准标准曲线和回归方程见图2。

表1 盐酸西布曲明系列标准溶液各浓度下的峰面积

图2 校准标准曲线及回归方程

由计算机中Excel程序自动根据以上不同浓度下测得的峰面积拟合成标准曲线回归方程(浓度符号引用GB 3102.8-1993)：

A_标=B_1标ρ_标+B_0标=20766875.9779mL/g×ρ_标-6.48605(1)

式中：

A_标—标准溶液峰面积，单位mAU·s(色谱图上标注的非SI单位)，可视为无量纲，以下同；

B_1标—标准曲线(直线)斜率，mL/g;

ρ_标—标准溶液浓度，g/mL;

B_0标—标准曲线截距，单位mAU·s，可视为无量纲，以下同。

(4)称取减肥胶囊内容物约0.3g两份，精密称定，为0.3021g和0.3005g，分别置100mL容量瓶中。加流动相溶液适量，超声提取10min，放冷至室温，加流动相溶液稀释至刻度，摇匀。用1mL吸量管精密量取上述溶液1mL，置10mL容量瓶中，用流动相溶液稀释至刻度，摇匀，静置后取上清液经0.45um滤膜过滤，待测。

滤液在配有DAD检测器的高效液相色谱仪测定，测得两份平行试样积分峰面积示值见表2。

表2 两份平行试样积分峰面积及含量测定结果

(5)按拟合标准曲线方程算出减肥胶囊样品中盐酸西布曲明的浓度，由计算机EXCEL程序自动计算．计算结果见表2。本例样品的盐酸西布曲明百分含量按下述1.3的式(2)计算 ，由P_SH1与P_SH2取均值。测得值为：PSH=4.16％。

1.3减肥胶囊样品中盐酸西布曲明含量的计算公式

由国家药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目2006004号批准件及《中国药典》(本例根据实际情况采用标准曲线法)(本文将《中国药典》中浓度符号。按照GB 3102.5-1993的要求·改为ρ得：

样品中盐酸西布曲明的含量按下式计算：

其中：

将式(4)代入式(2)：

则：

式(2)～式(5)中：

ρ_试样—供试品溶液中盐酸西布曲明的浓度，g/mL;

A_试样—供试品溶液中盐酸西布曲明的峰面积，mAU·s，视为无量纲；

B_0标—标准溶液回归方程的截距，mAU·s，视为无量纲；

B_1标—标准溶液回归方程的斜率，标准曲线(直线)斜率，mL/g;

P_SH—供试品中盐酸西布曲明(按重量计)的含量，％；

F—样品稀释体积，mL ;

V₁—配制样品溶液使用的容量瓶容积， 100mL;

V₂—配制供试品溶液使用的容量瓶容积，10mL;

V₃—移取样品溶液使用的单标线吸量管容积,1mL;

m—供试品取样量，g。

文章来源：《食品药品检测测量不确定度评定实例》

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