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红霉素肠溶胶囊效价的测量不确定度评定—测量方法(一)

发布时间:2018-11-23 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:699

1 测量方法

依据中国药典微生物检定法的规定,效价定义如下:抗生素的抗菌效力通常用效价单位来表示,抗生素的效价单位均采用活性成分的质量1ug=1效价单位(u)的方法表示,效价测定是测量与标准品比较的相对效价(百分比)。

1.1实验条件

1.1.1仪器设备

(1)电子分析天平:

型号:Sartorius CP225D;最大量程:80g/220g;分度值:d=0.01mg/0.1mg, e=0.1mg/1mg。

(2)隔水式培养箱。

(3)抑菌圈测量仪:

型号:ZY300-IV;重复性相对标准差(RSD)的限界:≤1.0%;抑菌圈直径的测量允差:±0.5mm。

(4)移液管:5mL, A级。

(5)容量瓶:25mL、50mL、100mL、250mL,均为A级。

(6)双碟、毛细滴管、刻度吸管(均无须准确定量)。

(7)小不锈钢管。

1.1.2试剂与样品

(1)培养基:抗生素检定培养基工(pH7.9±0.1),北京三药科技开发公司生产,批号:110505;

(2)试验菌:短小芽孢杆菌[CMCC(B)63202]菌液,(1→5)稀释后加人培养基(与培养基体积按0.3%比例),冻干菌种由中检院出产;

(3)标准品:红霉素标准品(中检院出产,No. :130307-2007169938u/mg);

(4)样品:红霉素肠溶胶囊(深圳万和制药有限公司出产,批号:131101,规格:0.25g);

(5)磷酸二氢钾磷酸氢二钾:均为分析纯。

1.1.3实验环境

温度:25℃;相对湿度:50%

1.2测定方法与不确定度来源分析

1.2.1测定方法

操作流程如图1所示。

图1 操作流程图

按《中国药典》二部附录及《中国药品检验标准操作规范》抗生素微生物检定法“管碟法”的技术规定,测定步骤如下:

(1)试验准备

双碟(有盖子的培养皿称为“双碟”)、毛细滴管、刻度吸管、钢管的清洗及灭菌,容量瓶、移液管的清洗,培养基、缓冲液的准备,半无菌间的紫外消毒等。

(2)预试验

确定最佳的试验条件:调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等,使预期的抑菌圈大小符合规定(高剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在18mm~22mm)。

(3)双碟的制备

每只双碟加底层培养基约20mL,平行制备10份(药典规定最终报告不少于4份),待培养基凝固后,将双碟放入35℃~37℃培养箱中,待用。

(4)供试品、标准品溶液的制备

①供试品溶液的制备:取本品内容物,混匀,研细,精密称取供试品约0.4g(每粒胶囊内容物约0.4g,相当于红霉素0.25g,取第一个平行样的数据,WT=0.4109g),用乙醇25mL研磨分次转移置250mL容量瓶中(VT=2S0mL),加灭菌水至刻度,摇匀。分别精密量取5mL,置于50mL和100mL容量瓶中,分别加pH7.8磷酸盐缓冲液至刻度,摇匀。再分别精密量取上述 50mL和100mL量瓶中的溶液5mL,置50mL和100mL量瓶中,分别加pH7. 8磷酸盐缓冲液至刻度,摇匀,即得高、低浓度(理论浓度)分别为10u/mL,5u/mL的供试品溶液。

②标准品溶液的制备:精密称取红霉素标准品约0.026g(Ws=0.02641g),置于25mL容量瓶中(Vs=25mL),用约3mL乙醇使之溶解,加灭菌水至刻度,摇匀,与供试品溶液制法相同,得到高、低浓度(理论浓度)分别为 10u/mL、5u/mL的标准品溶液。

注:制备供试品溶液和制备标准品溶液所用的5mL移液管、50mL和100mL容量瓶的容量和等级是相同的,并且体积在初始的计算公式(本案例未列出)中被约分了。此处认为它们的容量分散性也被抵消了。

(5)菌层培养基的制备

菌层培养基温度控制在50℃~60℃,根据预试验,加入0.3%的试验菌液,注意控制加入双碟菌层的速度和菌层的平整度。

(6)加小不锈钢管

(7)滴加供试品和标准品溶液至菌层培养基

按管碟法标准品、供试品溶液滴加顺序及高低剂量溶液的滴加顺序,控制加样操作,以保证滴加样品溶液的速度及量均匀一致。

(8)双碟的培养

将已滴加抗生素溶液的培养皿移置培养箱中,水平放置,37℃±1℃培养16h。

(9)抑菌圈的测量

使用抑菌圈测量仪,每组(一次测量)试验双碟应在相同的测量参数下进行测量。

相关链接:多种维生素片中灰分含量的测量不确定度评定—扩展不确定度的评定

文章来源:《食品药品检测测量不确定度评定实例》

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