G418通过干扰核糖体的功能而阻断细胞的蛋白合成

1.G418 G418是一种氨基糖苷类抗生素 ,这种氨基糖类抗生素的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似，在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。它通过抑制转座子Tn601，Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生毒素 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。

2.G418使用方法 室温下运输, 干粉在室温下储存，溶于水、甲醇，溶液于-20℃储存 由于各真核细胞系对G418敏感度不同,各新细胞系或株稳定转染时杀死非稳定转染细胞所需用量需要通过实验优化。最适用量通过建立细胞死亡曲线获得。将细胞稀释至1000cell/ml，每孔100ul加入有培养基的24孔板，将每孔中的G418浓度稀释0,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100ug/ml等12个级别, 培养10-14天，以最低细胞全部死亡浓度为基准，一般400-800左右，筛选时比该浓度再高一个级别，维持时使用筛选浓度的一半即可。

3.G418选择浓度范围

细胞系或机体 G418浓度（ug/ml）

中国仓鼠卵巢细胞 700～800

Madin－Darby犬肾细胞 500

人上皮A431细胞 400

猿CV-1细胞 500

盘基网柄菌属 10～35

植物 10

酵母 125～500

4.G418质量指标 G418 ：白色粉末，融点138～144℃，溶于水、甲醇。 CAS No.：108321-42-2

分子式 ：C20H40N4O10 •2H2SO4分子量 ：692.71

比旋：+104o～+121o水分：≤10% 吸光值：≤0.015 (280nm,1mg/ml), ≤0.1 (570nm, 100mg/ml)

效价： >700 ug/mg[储运] 室温下运输, 干粉在室温下储存，溶液于-20℃储存。

（转自生物谷）