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食品中水溶性维生素检验(一)

发布时间:2018-11-29 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1540

(一)维生素B1测定

维生素B1又名硫胺素(thiamin),根据其生理功能又称为抗脚气病和抗神经炎维生素。呈白色粉末状结晶,易溶于水和正丁醇异丁醇等有机溶剂,微溶于乙醇。酸性条件下较为稳定,较耐热且不易被氧化;中性和碱性环境中易被氧化破坏,生成硫色素。

食品中维生素B1的测定方法有硫色素荧光法(GB/T 5009.84)、高效液相色谱法、紫外分光光度法等。由于分光光度法灵敏度和准确度较差,适合于硫胺素含量高的食物样品;而荧光分光光度法和高效液相色谱法灵敏度较高、抗干扰能力强,适用于微量硫胺素的测定。其中高效液相色谱法(GB 5413.11和GB/T 9695.27)分别适用于婴幼儿食品及乳品、肉及肉制品中维生素B1的测定,其检测原理均是用碱性铁氰化钾将游离的硫胺素氧化为硫色素,正丁醇(或异丁醇)萃取后,经C18反相色谱柱分离,用荧光检测器检测,标准曲线法定量。本节重点介绍荧光分光光度法。

1.原理硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成硫色素,硫色素在紫外光照射下,发射荧光。在一定条件下,其荧光强度与硫色素浓度成正比,即与溶液中硫胺素含量成正比,与标准比较定量。反应式如下:

2.分析步骤

(1)样品处理

1)提取:准确称取适量匀浆或粉碎样品,加稀4k酸溶解,高压加热水解(121℃,30分钟)后冷却,调节pH至4.5,淀粉酶和蛋白酶45~50℃酶解过夜,过滤。

2)净化:将提取液加入装有人造浮石的盐基交换管中,硫胺素被吸附于人造浮石上,用热水洗去杂质后再用热的酸性氯化钾溶液洗脱硫胺素,收集洗脱液并定容,即得试样净化液。同时用硫胺素标准使用液按上法操作,得标准净化液。

3)氧化:取两份试样净化液于反应瓶,在避光条件下一瓶加入氢氧化钠溶液,另一瓶加入碱性铁氰化钾溶液,分别作为试剂空白和试样,振摇后加正丁醇萃取。标准净化液进行同样操作。

(2)测定:于激发波长365nm、发射波长435nm处,依次对样品空白、标准空白、样品溶液和标准溶液测定荧光强度,计算样品中硫胺素含量。

3.方法说明

(1)本方法检出限为0.05ug,线性范围为0.2~10ug。

(2)为使样品中结合态硫胺素变为游离态以利于测定,需对样品进行酸水解和酶水解。

(3)紫外线会破坏硫色素,因此,测定过程应快速并避光。碱性铁氰化钾的用量要适中,用量不足使测定结果偏低,而过量则会破坏硫色素,操作中应保持加入试剂速度一致。用正丁醇提取硫色素,不宜过分振摇,以免乳化,不易分层。

(二)维生素B2测定

维生素B2又名核黄素(riboflavin),为黄色粉末状结晶,微溶于水,对空气、热稳定,在中性和酸性溶液中不易被破坏,但在碱性溶液中较易分解。核黄素对光敏感,易被紫外线破坏,在碱性溶液中光线照射可产生有较强荧光的光黄素。

测定核黄素常用的方法有荧光法(GB/T- 5009.85)、高效液相色谱法(GB 5413.12和GB/T9695.28)、微生物法(GB/T 5009.85)等。本节主要介绍荧光分光光度法。

1.原理核黄素在440~500nm波长光照射下产生黄绿色荧光,在稀溶液中,荧光强度与核黄素含量成正比. 在525nm波长下测定样品的吸光度值,再加入低亚硫酸钠(连二亚硫酸钠),将核黄素还原为无荧光的物质并测定样液中杂质的荧光强度,两者之差即为样品中核黄素所产生的荧光强度。反应式如下:

2.分析步骤

(1)样品处理

1)提取:准确称取适量样品,加入稀盐酸水解后调节pH 4.5,再加入淀粉酶或木瓜蛋白酶37~40℃酶解16小时,定容,过滤。

2)氧化去杂质:取一定量提取液和标准使用液,加入适量水和冰乙酸,用高锰酸钾溶液氧化去除杂质,再加数滴过氧化氢除去多余的高锰酸钾直至溶液红色褪去,剧烈振摇使氧气逸出。

3)吸附和洗脱:将氧化除杂质的样品溶液和标准核黄素溶液分别通过硅镁吸附柱,核黄素被吸附在柱上,先用热水除去杂质,再用丙酮-冰乙酸-水(5+2+9)混合液和水依次洗脱核黄素,合并洗脱液井定容,待测。

(2)测定:于激发光波长440nm,发射光波长525nm处测定样品管和标准管的荧光强度,并在各管的剩余溶液中加入低亚硫酸钠,立即混匀,在20秒内测定各管的荧光强度作为样品和标准空白。计算得到样品中核黄素含量。

3.方法说明

(1)本方法检出限为0.006ug,线性范围为0.1~20ug。

(2)核黄素对可见或紫外光极不稳定,实验应在避光条件下进行。

(3)核黄素被低亚硫酸钠还原为无荧光物质,但摇动后很快又被氧化成荧光物质,所以要立即测定。

相关链接:食品中脂溶性维生素检验

文章来源:《食品理化检验》

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