生物毒素是由各种生物(动物、植物、微生物)产生的有毒化学物质，为天然毒素。包含有毒动物、有毒植物、微生物毒素等，常见的有：河豚鱼、毒蕈、杏仁、木薯、桐籽、棉籽、真菌等。

一、真菌毒素快速检验

真菌毒素是真菌在食品或伺料里生长所产生的代谢产物，对人类和动物都有害。通常以霉菌毒素为主，常见的有黄曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-硝基丙酸等。摄食含有真菌毒素的食物后，会出现恶心、呕吐、腹泻、头痛、发热等症状，严重者可导致死亡。其中以黄曲霉毒素毒性最强，通常采用酶联免疫吸附法(ELISA)、胶体金免疫层析等方法进行快速筛检。ELISA法在本书真菌毒素检测中已详细介绍。本节主要介绍胶体金免疫层析法。

胶体金免疫层析法(快速检测卡法)：将样品提取液加人检测卡上的加样孔，检测液中的黄曲霉毒素B₁(AFTB₁)与金标垫上的金标抗体结合形成复合物，若AFTB₁在检测液中的浓度低于灵敏度值，未结合的金标抗体在检测区(T区)与固定在硝酸纤维素(NC)膜上的AFTB1-BSA偶联物结合，形成可见T线；若AFTB₁在检测液中的浓度高于灵敏度值，金标抗体全部形成复合物，不会再与AFTB1-BSA偶联物结合形成可见T线。未固定的复合物与对照区(C区)的二抗体形成对照线，表明检测卡有效。本法灵敏度5ppb。

二、河豚毒素快速检验

河豚毒素(tetrodotoxin, TTX)是一类存在于河豚鱼及其他生物体内含有的剧毒生物碱，又称蝾螈毒素、东方纯毒素，是一种通过阻断钠离子通道抑制神经冲动的小分子非蛋白类神经毒素，其毒性比氰化钾大近1000倍，对人的致死量为0.5mg。分子式为：C₁₁H₁₇O₈N₃，分子量为319，纯品为无色柱状结晶，对热稳定，220℃以上分解。结构式如下：

河豚毒素的快速检验方法主要有化学分析法、生物检验法、固定酶法、间接竟争ELISA法，我国规定鲜河豚鱼中河豚毒素的标准分析方法(GB/T5009.206)为酶联免疫吸附法。根据固定酶法、ELISA法原理制成河豚毒素快速试剂盒用于河豚毒素的定性、半定量和快速筛选，再以HPLC、GC/MS、HPLC/MS等方法进行确证实验。本节介绍河豚毒素快速试剂盒法。通常先将共存的杂质分离除去后，用化学显色反应和生物方法进行检验。

1．毒素提取试样经沉淀蛋白质、胆碱类物质后，根据河豚毒素易溶于酸性溶液的性质，可经0.5％乙酸溶液煮沸提取两次，离心，取上清液供检测。

2．快速筛检

(1)硫酸-重铬酸钾显色实验：将上述提取液，加入重铬酸钾，如果样品中有河豚毒素，则显绿色。

(2)生物检测：将毒素提取液，灭菌，放冷后注射于青蛙体内，如果数分钟后青蛙呈麻痹状态，最后因呼吸麻痹而死亡，则表明样品中含河豚毒素。

3.酶联免疫吸附法取上述河豚毒素提取液，以乙醚振摇脱脂后，与定量的特异性酶标抗体反应，多余的游离酶标抗体与酶标板内的包被抗原结合，加入反应底物四甲基联苯胺(TMB)后显色，以硫酸中止反应，在450nm波长下测定吸光度值，标准曲线法定量。

三、毒蕈快速检验

毒蕈(noxious mushroom)是指食后能引起中毒的蕈类。我国有近300种食蕈；毒蕈约80种，较常见的有毒蝇蕈、白帽蕈、瓢蕈、月夜蕈等。其中有毒成分主要为毒蝇碱(amanitamuscaria)和毒肽( phallotoxins)。常见的毒蕈毒素的快速检验方法有结晶鉴别法、纸色谱法和薄层色谱法。以下介绍常见的鹅膏亭毒素和毒蝇碱的快速检测方法。

1. 毒肽(鹅膏亭毒素)检验取适量样品加甲醇，水浴加热浸提，过滤，蒸干滤液。残渣用数滴甲醇溶解，作为待检液。在层析纸上点样，以丁酮-丙酮-水-正丁醇(20+6+5+1)作展开剂，展开40分钟，晾干后喷显色剂肉桂酸甲醇溶液，自然挥干后，将用浓盐酸熏5～10分钟，层析纸上若有紫色或蓝色斑点出现，则表示样品中有鹅膏亭毒素存在。若出现橙色、黄色或粉红色斑点则为阴性。

2．毒蝇碱检验毒蝇碱又称蝇蕈碱，分子式为：C₉H₂₀O₂N ;分子量为：174。常以季铵盐的形式存在，易溶于乙醇和水，不溶于乙醚。

采用氨水-乙醇(1+19)溶液提取，使毒蝇碱的氯化物转变成毒蝇碱的氢氧化物，经减压浓缩后，加四硫氰基二氨铬酸铵(NH₄[Cr(SCN)₄·(NH₃)₂]·H₂O)生成沉淀而与杂质分离。洗净沉淀，用丙酮溶解，加入硫酸银和氯化钡溶液，生成氯化毒蝇碱而转入溶液。溶液再减压浓缩，以此为点样液。在pH4.5条件下，于层析纸上点样，以正丁醇-甲醇-水(10+3+20)为展开剂，展开2小时，晾干后用碱式碳酸铋、碘化钾和冰乙酸混合液作为显色剂，喷于层析纸上。如出现暗橙色表示样品中有毒蝇碱存在。

文章来源：《食品理化检验》

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