北京普天同创生物科技有限公司
(一)食品中维生素B1的测定——比色法原理
试样经水解、酶解,游离的硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中定量氧化成噻嘧色素,在紫外线下噻嘧色素发出荧光。在激发波长365nm、发射波长435nm处测定荧光强度,没有其他荧光物质干扰时,此荧光强度与噻嘧色素量成正比,以此计算硫胺素的含量。
本法摘自GB/T 9695.27—2008,适用于各类食物中硫胺素的测定,但不适用于有吸附硫胺素能力的物质和含有影响噻嘧色素荧光物质的样品。
(二)注意事项
①如样品中含杂质过多,应经过离子交换剂处理,使硫胺素与杂质分离,然后以所得溶液进行测定。
②样品与亚铁氰化钾溶液混合后,所呈现的黄色至少保持15s,否则应再滴加1~2滴。
③紫外线能破坏硫色素,形成硫色素后要迅速测定,并避光处理。
④氧化是操作的关键步骤,操作中要保持加试剂速度一致。
⑤人造沸石活化处理,具体如下:
a.处理方法将40~60目人造沸石颗粒置于烧杯中,加约5倍量的热水搅拌,静置后倾出上清液,重复操作,直至上清液透明,加约5倍量的3%乙酸溶液搅拌浸泡10min,静置后倾去上清液,重复3次。加入约5倍量的酸性氯化钾溶液,在沸水浴中加热25min,弃去上清液,用3%乙酸溶液洗涤2次后,用水反复洗至无氯离子为止(可用硝酸银溶液检查)。将处理好的人造沸石浸没于水中保存,也可于80℃存放备用。
b.回收率的测定 吸取2.00mL维生素B1标准工作液于100mL容量瓶中,用水定容。吸取25.OOmL稀释液两份,一份做净化、氧化、测定处理,另一份只做氧化、测定处理。净化回收率大于85%即可。
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