紫外-可见分光光度计是药物分析与药品检验中应用最早和最广的现代分析仪器，对其基本结构及校正和检定的了解对于执行《中国药典》和其他药品质量标准具有重要的意义。

一、仪器的基本结构

紫外-可见分光光度计的基本结构由五部分组成，分别为光源、单色器、吸收池、检测器和信号指示系统。

1. 光源 常用的光源有热辐射和气体放电两类。热辐射光源用于可见光区，如钨丝灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。

2．单色器 单色器通常由入射狭缝、出射狭缝、平行光装置、色散元件，聚焦透镜或反射镜等组成。色散元件有棱镜和光栅两种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200～400nm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。光栅系将反射或透射光经衍射而达到色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长做线性排列，故为匀排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件。

3．吸收池一般有石英和玻璃材料两种。石英池适用于可见光区及紫外光区，玻璃吸收池只能用于可见光区。

4．检测器常用的检测器有光电池、光电管和光电倍增管等。

5．信号指示系统常用的信号指示装置有直读检流计、电位调节指零装置以及数字显示或自动记录装置等。

更具体地说，紫外-可见分光光度计主要由电光系统、光学系统、光电系统、电子系统、机械系统和数据处理、输出打印系统等几个部分组成，如图18-1所示。

图18-1 紫外-可见分光光度计示意图

由光源发出的光，经单色器获得一定波长的单色光，照射到样品溶液被吸收后，经检测器将光强度变化转变为电信号变化，并经信号显示系统调制放大后，显示或打印测量结果。

二、仪器的校验和检定

(一)波长的准确度

1．波长准确度的允差范围紫外-可见分光光度计波长准确度的允许误差：紫外区为±1nm，500nm处为±2nm。

2．波长准确度检定方法

(1)用低压汞灯检定：关闭仪器光源，将汞灯(用笔式汞灯最方便)直接对准入射狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，采用波长扫描方式，较慢的扫描速度、最小的狭缝宽度和合适的量程，在200～800nm内单方向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值(若仪器无“峰检测”功能，必要时可对指定波长进行“单峰”扫描)。

用于检定紫外-可见分光光度计的汞灯谱线波长：237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、302.15nm、313. 16nm、334.15nm、365.02nm、365.48nm、366.33nm、404.66nm(紫色)、435.83nm(蓝色)、546.07nm(绿色)、576.96nm(黄色)及579.07nm。

(2)用仪器固有的氘灯检定：本法主要用于日常工作中波长准确度的核对。取单光束能量测定方式，测量条件同上述低压汞灯的方法，对486.02nm及656.10nm二单峰进行单方向重复扫描3次。

(3)用氧化钬玻璃检定：将氧化钬玻璃放入样品光路，参比光路为空气，按测定吸收光谱图的方法测定。校正自动记录仪器时，应考虑记录仪的时间常数，测定样品与校止时取同一扫描速度。

氧化钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.7nm、460.0nm、484.5nm,536.2nm及637.5nm波长处有尖锐的吸收峰，可供波长检定用。氧化钬玻璃囚制造的原因，每片氧化钬的吸收峰波长有差异，另外在放置过程中也会发生波长漂移，囚此需定期由计量部门校验。

(4)用高氯酸钬溶液检定：本法可供没有单光束测定功能的双光束紫外一分光光度计波长准确度检定用。

高氯酸钬溶液的配制方法是取10％高氯酸为溶剂，加入氧化钬(Ho₂O₃)配成4％的溶液，即得。高氯酸钬溶液较强的吸收峰波长为241.13nm、278.10nm、287.18nm、333.44nm、345.47nm、361.31nm、416.28nm、451.30nm、485.29nm、536.64nm、640.52nm。

如果是双光束扫描仪器，但不是数据储存型的(指直接将信号描记于记录纸上)，记录的波长可能因记录笔滞后而非真实波长，为了准确测定，建议采用定点检定而不用扫描方式。

(二)吸光度的准确度

可用重铬酸钾的硫酸溶液对吸光度的准确度进行检定。取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg,精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表18-1中的规定。

表18-1 吸光度的准确度要求

(三)杂散光的检查

可按表18-2中所列的试剂和浓度配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表18-2中的规定。

表18-2 杂散光的检查方法与要求

噪声与漂移、透射比的最大允许误差与重复性、基线平直度和电源电压的适应性等检定项目，需按现行国家质量监督检验检疫总局发布的“紫外、可见、近红外分光光度计”的检定规程进行检定，应符合有关项下的规定。日常使用中，对波长和吸光度的准确度应根据需要随时检查。

相关链接：薄层色谱法的应用

文章来源：《实用化学药品检验检测技术指南》

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