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液相色谱-质谱联用的出现是化学分析领域的一大飞跃,这项技术的突破依赖于接口技术的发展,但在使用这项技术时,色谱条件与质谱条件均需要进行优化。
一、LC-MS条件的选择
1.接口的选择 ESI适合于中等到强极性的化合物分子,特别是那些在溶液中能预先形成离子的化合物和可以获得多个质子的大分子(如蛋白质);APCI不适合可带多个电荷的大分子,其优势在于弱极性或中等极性的小分子的分析。
2.正、负离子模式的选择 一般止离子模式适合于碱性样品,可用醋酸或甲酸对样品加以酸化。样品中含有仲胺或叔胺时可优先考虑使用止离子模式。而负离子模式则适合于酸性样品,可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。样品中含有较多的强负电性基团,如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模式。
3.流动相的选择常用的流动相为甲醇、乙腈、水和它们不同比例的混合物以及一些易挥发盐的缓冲液如甲酸铵、醋酸铵等。还可以加入易挥发的酸、碱如甲酸、醋酸和氨水等调节pH。LC-MS接口避免进入不挥发的缓冲液,避免含磷和氯的缓冲液,含钠和钾的成分必须小于1 mmol/L盐分太高会抑制离子源的信号和堵塞喷雾针及污染仪器);含甲酸(或醋酸)<2%;含三氟乙酸不大于0.5 %;含二乙胺<1%;含醋酸铵<10-5)mmol/L。
4.流量和色谱柱的选择 一般不加热ESI的最佳流速是1~50ul/min,应用4.6mm内径的LC柱时柱后需要分流,目前大多采用1~2.1 mm内径的微柱;TIS源的最高流速可达1ml/min,建议使用0.2~0.4ml/min;而APCI的最佳流速约1ml/min,常规的直径4.6mm柱最合适。为了提高分析效率,常采用小于100mm的短柱。
5.辅助气体流量和温度的选择 雾化气对流出液形成喷雾有影响,干燥气影响喷雾的去溶剂效果,碰撞气影响二级质谱的产生。操作中温度的选择和优化主要是指接口的干燥气体而言,一般情况下选择干燥气的温度高于分析物的沸点20℃左右即可。对热不稳定性化合物,要选用更低的温度以避免显著的分解。选用干燥气的温度和流量大小时还要考虑流动相的组成,有机溶剂的比例高时可采用适当低的温度和小一点的流量。
6. 样品的预处理 为保护仪器,防止固体小颗粒堵塞进样管道和喷嘴,防止污染仪器,降低分析背景,排除对分析结果的干扰,要求获得最佳的分析结果,从ESI电离的过程分析,ESI电荷是在液滴表面,样品与杂质在液滴表面存在竟争,不挥发物(如磷酸盐等)妨碍带电液滴表面的挥发,大量杂质妨碍带电样品离子进入气相状态,增加电荷中和的可能性。样品预处理的常用方法包括超滤、溶剂萃取/去盐、固相萃取、灌注净化/去盐、色谱分离、甲醇或乙腈等沉淀蛋白、酸水解/酶解、衍生化等。
二、化合物鉴别
1.全扫描方式(Ql扫描) 全扫描数据采集可以得到化合物的准分子离子,从而可判断出化合物的分子量,用于鉴别是否有未知物,并确认一些判断不清的化合物,如合成化合物的质量及结构。
2.子离子分析(MS/MS) 用于结构判断(得到化合物的二级谱图即碎片离子)和选择离子对做多种反应监测(MRM)。子离子谱图与锥体电压断裂谱图(源内CID)相似。
三、化合物分析
1.选择离子监测 选择离子监测用于检测已知或目标化合物,比全扫描方式能得到更高的灵敏度。这种数据采集的方式一般用在定量目标化合物之前,而且往往需要已知化合物的性质。若几种目标化合物用同样的数据采集方式监测,那么可以同时测定几种离子。
2.母离子扫描 母离子分析可用来鉴定和确认类型已知的化合物,尽管它们的母离子的质量可以不同,但在分裂过程中会生成共同的子离子。
3.中性丢失扫描中性丢失扫描分析可用来鉴定和确认类型已知的化合物,例如新生儿遗传疾病筛查中的某些检测项目。也可以帮助进行未知物的结构判断,例如有中性丢失18D的意味着H2O,中性丢失28一般为CO,中性丢失30为HCOH,中性丢失32为CH3OH,中性丢失44为CO2等。
文章来源:《实用化学药品检验检测技术指南》
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