北京普天同创生物科技有限公司
1 范围
本标准规定了牛肌肉中氟胺烟酸残留量的液相色谱-紫外检测法。
本标准适用于牛肌肉中氟胺烟酸残留量的测定。
本标准的方法检出限为:0.005 mg/kg。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T 6379.1测定方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)
GB/T 6379.2测定方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)
3 原理
样品中氟胺烟酸采用β-葡萄糖苷酸酶降解,然后用乙腈提取、浓缩,磷酸盐缓冲溶液溶解,SPE-C18净化和富集,利用适当的洗脱溶剂对固相萃取柱上富集的组分进行选择性淋洗,通过高效液相色谱的紫外检测器进行分析测定,外标法定量。
4 试剂和材料
除另有说明外,所有试剂均为分析纯。水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 甲酸。
4.2 冰乙酸。
4.3 β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase)15000 U/mL:例如:β-葡萄糖苷酸酶(600000U/g),准确称取0.0500g β-葡萄糖苷酸酶于5 mL玻璃试管中,加2 mL的磷酸盐(PBS)缓冲溶液溶解,用0.45 um尼龙滤膜过滤。使用前现配制。
4.4 葡萄糖。
4.5 浓盐酸。
4.6 流动相A:乙酸铵0.05mol/L, pH 5.0:准确称取3.90 g乙酸铵于1000 mL的烧杯中,加900 mL水溶解并用甲酸调整至pH 5.0,转移至1000 mL容量瓶中,使用前过0.45 um滤膜。
4.7 流动相B:甲醇,色谱纯。
4.8 流动相C:乙腈,色谱纯。
4.9 混合流动相:将40 mL流动相B,30 mL流动相C以及30 mL流动相A相混合。
4.10 磷酸盐(PBS)缓冲溶液:称取0.8 g氯化钠,0.02g氯化钾,0.02 g磷酸二氢钾,0.115 g磷酸氢二钠和0.02 g葡萄糖于250 mL烧杯中加约90 mL的水溶解,用0.1 mol/L磷酸调整pH6.0,转移至100 mL容量瓶中并稀释至刻度。
4.11 85%磷酸。
4.12 乙酸钾溶液:0.04 mol/L。称取1.95 g乙酸钾于500 mL容量瓶中,加约450 mL水溶解并稀释至刻度。
4.13 氯化钾。
4.14 磷酸二氢钾。
4.15 磷酸二氢钾缓冲溶液:0.25 mol/L,pH 7.0。称取17.01 g 磷酸二氢钾溶于400 mL水中,定容到500 mL,然后用0.25 mol/L磷酸氢二钠调节pH至7.0(约500 mL),定容到1L。
4.16 氯化钠。
4.17 无水磷酸氢二钠。
4.18 磷酸氢二钠溶液:0.25 mol/L。称17.75 g磷酸氢二钠溶于400 mL水中,定容到500 mL。
4.19 乙酸正己烷溶液:乙酸+正己烷(10+90)。
4.20 正己烷:色谱纯。
4.21 标准物质:氟胺烟酸,纯度>99%。
4.22 标准储备液:50 ug/mL。称取适量的氟胺烟酸标准物质,用甲醇配成50 ug/mL的标准储备液。2℃~4℃保存,有效期为3个月。
注:称取标准物的质量是按纯度修正过的质量。
4.23 标准工作溶液:2 ug/mL。吸取适量的氟胺烟酸的标准储备液(4.22),用甲醇配制成2 ug/mL的混合标准工作溶液,2℃~4℃保存,有效期为1个月。
4.24 标准基质溶液:根据氟胺烟酸的灵敏度和仪器线性范围,用空白样品提取液配制成不同浓度(ug/mL)标准基质溶液。
5 仪器
5.1 液相色谱仪:配有紫外检测器。
5.2 电子天平:感量为0.01 g和0.0001g。
5.3 离心机:最大转速为10000r/min。
5.4 离心管:50 mL聚丙烯离心管。
5.5 均质机。
5.6 振荡器。
5.7 微量移液器:10uL~100uL和1000uL~5000uL。
5.8 氮气浓缩仪。
5.9 酸度计:测量精度为士。.020
5.10 样品过滤器:PTFE, 0.45 uL。
5.11 固相萃取柱:Bond Elut Certify Ⅱ, 3 mL, 200 mg或相当者。
5.12 真空固相萃取装置。
5.13 旋转蒸发仪。
文章来源:《化学试剂标准汇编》
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