牛肝和牛肉中睾酮、表睾酮、孕酮残留量的测定(一)
来源/作者:中国标准物质网  日期:2019-01-29

1 范围

本标准规定了牛肝和牛肉中睾酮、表睾酮和孕酮残留量的液相色谱串联质谱测定方法。

本标准适用于牛肝和牛肉中睾酮、表睾酮、孕酮残留量的测定。

本标准的方法检出限:肝脏中睾酮、表睾酮、孕酮为0.5 ug/kg,肌肉中睾酮、表睾酮为0.1ug/kg,孕酮为0.5 ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2;1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)

3 原理

牛肝和牛肉中的睾酮、表睾酮、孕酮药物残留经酶解后用甲醇叔丁基甲醚提取,提取液用C18固相萃取柱净化,肝脏样品需再经硅胶固相萃取柱净化,洗脱液浓缩定容后,供液相色谱-串联质谱测定。

4 试剂和材料

除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 乙腈:色谱纯。

4.2 甲醇:色谱纯。

4.3 叔丁基甲醚:色谱纯。

4.4 正己烷:色谱纯。

4.5 三氯甲烷

4.6 甲酸铵

4.7 β-葡糖昔酸酶和硫酸酯酶: H-2型,helix pomatia。

4.8 磷酸盐缓冲液:1.0 mol/L。称取13.6 g磷酸二氢钾溶于100 mL水中,称取8.7g磷酸氢二钾溶于50 mL水中,分别取70 mL磷酸二氢钾水溶液和28 mL磷酸氢二钾水溶液,混匀后调节pH值为5.0,置4℃中可保存1周。

4.9 饱和氯化钠水溶液。

4.10 水饱和乙酸乙酯

4.11 睾酮、表睾酮、孕酮标准物质:纯度≥99%;氘代睾酮(d5-睾酮)、氘代孕酮(d9-孕酮)内标标准物质:纯度≥98%。

4.12 标准储备溶液:100 ug/mL。准确称取适量的睾酮、表睾酮、孕酮标准物质,用甲醇分别配制成100 ug/mL的标准储备溶液,-18℃贮存,可使用6个月。

4.13 标准工作溶液:5 ug/mL。分别吸取5 mL 睾酮、表睾酮、孕酮标准储备溶液(4.12)至100 mL容量瓶中,以甲醇稀释并定容,此标准工作溶液的浓度为5 ug/mL。-18℃贮存,可使用6个月。

4.14 混合标准工作溶液:50 ug/L。分别吸取1.00 mL 睾酮、表睾酮、孕酮标准工作液(4.13)至100 mL容量瓶中,以甲醇稀释并定容,此混合工作溶液的浓度为50 ug/L。-18℃贮存,可使用3个月。

4.15 内标储备溶液:100 ug/mL。准确称取适量的氘代睾酮(d5-睾酮)、氘代孕酮(d9-孕酮)标准品,用甲醇分别配制成100 ug/mL的内标储备溶液,-18℃贮存,可使用6个月。

4.16 内标工作溶液:5 ug/mL。分别吸取5 mL氘代睾酮(d5-睾酮)、氘代孕酮(d9-孕酮)内标储备溶液(4.15)至100 mL容量瓶中,以甲醇稀释并定容。-18℃贮存,可使用6个月。

4.17 内标混合工作溶液:25 ug/L。分别吸取0.50 mL氘代睾酮(d5-睾酮)、氘代孕酮(d9-孕酮)内标工作溶液(4.16)至100 mL容量瓶中,以甲醇稀释并定容。-18℃贮存,可使用3个月。

4.18 基质混合标准工作溶液:根据每种标准的灵敏度和仪器线性范围,吸取一定量的混合标准工作溶液(4.14)和内标工作溶液(4.16)。用空白样品提取液配成系列浓度的基质混合标准工作溶液。当天配制。

4.19 C18固相荃取柱:50mg,6mL,使用前依次用6 mL甲醇,6 mL水活化。

4.20 硅胶固相荃取柱:200mg,6mL。使用前用6mL正己烷活化:

4.21 滤膜:0.2um。

相关链接:可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定(三)

文章来源:《化学试剂标准汇编》

版权与免责声明:转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用,必须保留本网注明的"稿件来源",并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起两周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。

【关键词】孕酮 睾酮 甲醇 正己烷 磷酸氢二钾 中国标准物质