1 范围

本标准规定了河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中玉米赤霉醇(zearalanol)、玉米赤霉酮(zearalanone)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、己烷雌酚(hexestrol)、双烯雌酚(dienoestrol)残留量液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准用于河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定。

本标准的方法检出限：玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和双烯雌酚为1.0 ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/ T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008, ISO 3696:1987,MOD)

3 原理

用叔丁基甲基醚和乙酸盐缓冲液加酶解剂分别提取试样中残留的玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚，经硅胶柱净化，用液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯。

4.1 水：GBiT 6682，一级。

4.2 叔丁基甲基醚：色谱纯。

4.3 甲醇：色谱纯。

4.4 乙腈：色谱纯。

4.5 乙酸乙酯：色谱纯。

4.6 正己烷：色谱纯。

4.7 二氯甲烷：色谱纯。

4.8 乙酸：优级纯。

4.9 乙酸钠(CH₃COONa·3H₂O)。

4.10 氢氧化钠：优级纯。

4.11 3mol/L氢氧化钠溶液：称取120 g氢氧化钠(4.10)溶于1000 mL去离子水中。

4.12 0.2 mol/L乙酸盐缓冲液(pH=5.2)：称取2.52g乙酸(4.8)和12.95 g乙酸钠(4.9)溶解于800 mL水中，用氢氧化钠溶液(4.11)调节pH值至5.2±0.1，加水定容至1000mL。

4.13 溶解液：正己烷-二氯甲烷(3+2)。

4.14 淋洗液：乙酸乙酯-正己烷(3+47)。

4.15 洗脱液：乙酸乙酯-正己烷(3+2)，

4.16 β-葡糖苷酸酶/硫酸酯复合酶：含β-葡糖苷酸酶124 400 units/mL，硫酸酯酶3 610 units/mL。

4.17 激素及代谢物标准物质：玉米赤霉醇(包括a-玉米赤霉醇和β-玉米赤霉醇，各50%)纯度≥97％；玉米赤霉酮，纯度≥97％；己烯雌酚，纯度≥99％；己烷雌酚，纯度≥98%；双烯雌酚，纯度≥98%。

4.18 标准溶液：分别准确称取适量的玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、双烯雌酚和己烷雌酚标准物质，用甲醇(4.3)配制成1mg/mL标准贮备溶液。再根据需要以甲醇配制成不同浓度的混合标准溶液作为标准工作溶液，保存于4℃冰箱中。

4.19 内标标准物质：a-玉米赤霉烯醇-4氘代，纯度≥99％；己烯雌酚-8氘代，纯度≥98％。

4.20 内标标准溶液：准确称取适量a-玉米赤霉烯醇-4氘代和己烯雌酚-8氘代标准物质，用甲醇(4.3)分别配制成1 mg/mL标准贮备溶液。再以甲醇稀释成适用浓度的混合内标工作溶液，保存于4℃冰箱中。

4.21 基质提取液：空白样品，除不加入标准工作溶液(4.18)和内标标准工作溶液(4.20)外，其他同7.1.1.7.1.3处理后得到的溶液。

4.22 基质标准工作溶液：将标准工作溶液(4.18)及内标标准工作溶液(4.20)混合后在氮吹仪中吹干，以基质提取液(4.21)溶解，涡旋30 s后即为基质标准工作溶液。

4.23 硅胶固相萃取柱：500 mg, 3 mL。

4.24 滤膜：0.2 um。

5 仪器

5.1 液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾电离源。

5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.3 自动固相萃取仪或固相萃取装置。

5.4 高速均质器：转速大于10000r/min。

5.5 氮气吹干仪。

5.6 烘箱：控温精度±1℃。

5.7 涡旋振荡器。

5.8 离心机：转速大于3000r/min,

5.9 pH计：测量精度±0.3pH单位。

5.10 具塞离心管：25 mL，50mL。

5.11微量注射器：100 uL。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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