1 范围

本标准规定了河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素残留量的测定。

本标准的方法检出限：河豚鱼中的林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素均为2.0ug/kg。鳗鱼中的林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉他霉素均为2.0ug/kg，螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星均为5.0 ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 原理

河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素的残留用Tris缓冲溶液提取后，经Oasis HLB固相萃取柱净化，甲醇洗脱，洗脱液浓缩定容后，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯。

4.1 水：GB/T 6682，一级。

4.2 甲醇：色谱纯。

4.3 乙酸铵。

4.4 乙腈：色谱纯。

4.5 盐酸。

4.6 三羟甲基氨基甲烷(tris):C₄H₁₁NO₃。

4.7 氯化钙：CaCl₂·2H₂0。

4.8 甲醇溶液：2＋3。400 mL甲醇(4.2)与600 mL水混合。

4.9 0. 01 mol/L 乙酸铵溶液：0.77g乙酸铵(4.3)溶解于水中，定容于1000 mL容量瓶中。

4.10 定容液：0.01mol/L 乙酸铵溶液(4.9)＋乙腈(4.4)(17+3)。

4.11 tris溶液：称取12.0g 三羟甲基氨基甲烷(4.6)、7.35g氯化钙(4.7)溶解于1000 mL水中，用盐酸(4.5)调节pH值为9。

4.12 标准物质：林可霉素(CAS: 7179-49-9)、竹桃霉素(CAS: 7060-74-4)、红霉素(CAS: 59319-72-1),替米考星(CAS: 108050-54-0)、泰乐菌素(CAS: 74610-55-2),螺旋霉素(CAS: 8025-81-8)、吉他霉素(CAS: 1392-21-8)、交沙霉素(CAS: 16846-24-5)和内标物质罗红霉素(CAS: 80214-83-1)，纯度≥95％。

4.13 标准储备溶液Ⅰ：1.0 mg/mL。依次准确称取每种标准物质(4.12)适量，分别放入相应的10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀。4℃保存。

4.14 标准储备溶液Ⅱ:10.0 ug/mL。依次吸取0.1mL各标准储备溶液Ⅰ(4.13)，分别放入相应的10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。4℃保存。

4.15 标准工作溶液：2.0ug/mL。依次吸取2.0 mL混合标准储备溶液Ⅱ(4.14)，分别放入相应的10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

4.15 内标储备溶液：1.0 mg/mL。准确称取10.0 mg罗红霉素(4.12)于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，混匀。4℃保存。

4.17 中间浓度内标溶液：10.0 ug/mL。吸取0.1mL内标储备溶液(4.15)于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。4℃保存。

4.18 内标工作溶液：1.0 ug/mL。吸取1.0 mL中间浓度内标标准溶液(4.17)于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

4.19 基质标准混合工作溶液：

测定河豚鱼用基质标准混合工作溶液：分别吸取1.0uL、2.0uL、5.0uL、25.0uL标准工作溶液(4.15)，依次加入相应的试剂瓶中，再分别加入20.0uL内标工作溶液(4.18)，用样品空白提取液定容至1.0 mL。配成林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素分别为2.0ng/mL、4.0ng/mL、10.0 ng/mL、50.0 ng/mL的四个浓度水平的系列基质标准混合工作溶液。

测定鳗鱼用基质标准混合工作溶液：分别吸取林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉他霉素各1.0uL、2.0uL、5.0uL、25.0uL，标准工作溶液(4.15)和螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星各2.5uL、5.0uL、10.0uL、25.0uL标准工作溶液(4.15)，依次加入相应的试剂瓶中，再分别加入20.0uL内标工作溶液(4.18)，用样品空白提取液定容至1.0 mL。配成林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉他霉素分别为2.0 ng/mL、4.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL、和螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星分别为5.0 ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL的四个浓度水平的系列基质标准混合工作溶液。

4.20 Oasis HLB固相萃取柱：500 mg,6mL，或相当者。使用前，先后用10 mL甲醇和10 mL水活化，在抽真空前的各步骤中，都保持柱体湿润。

4.21 滤膜：0.2um。

相关链接：河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定（三）

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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