北京普天同创生物科技有限公司
5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾电离(ESI)源。
5.2 天平:感量0.1mg和0.01g。
5.3 组织捣碎机。
5.4 高速冷冻离心机:转速可达15000 r/min,制冷可达4℃。
5.5 离心机:5000r/min。
5.6 旋涡振荡器。
5.7 电热恒温振荡水槽。
5.8 pH计。
5.9 旋转蒸发仪。
5.10 固相萃取装置。
5.11 氮吹仪。
6 试样制备和保存
6.1 试样制备
取不少于500 g有代表性的牛奶或奶粉,充分混匀,分为两份,置于样品瓶中,密封,并做上标记。
6.2 试样保存
牛奶置于4℃冰柜中避光保存,奶粉则在室温下置于干燥器保存。
7 测定步骤
7.1 提取
7.1.1 牛奶
准确称取10g(精确到0.01g)牛奶样品于50 mL聚丙烯离心管内,加入50 uL 10ng/mL的内标物,加入20 mL 0.1mol/L盐酸溶液(4.14),涡旋混匀,于37℃下避光水浴振荡16 h(过夜),取出冷却至室温,涡旋混匀,4℃下15000 r/min离心10 min,分取10 mL上清液转移至另一50mL离心管内。加入5 mL 0.1mol/L高氯酸溶液(4.13),用10 mol/L氢氧化钠溶液(4.12)调节pH值至9.7±0.3,加入约2g氯化钠,再加入25 mL异丙醇-乙酸乙酯(3+2),涡动提取2 min,4500 r/min离心5 min,取出上清液至另一50 mL离心管中。再在下层水相中加15 mL乙酸乙酯-异丙醇(7+3),涡动提取1 min,4500 r/min离心5 min,合并有机相,40℃下旋转蒸发至近干,加入5 mL 0.1 mol/L盐酸溶液(4.14),涡动1 min,待净化。
7.1.2 奶粉
取12.5 g奶粉于烧杯中,加适量35℃~50℃水将其溶解,待冷却至室温后,加水至总质量为100 g,充分混匀后准确称取10g(精确到0.01g)样品于50 mL聚丙烯离心管中,按7.1.1步骤进行处理。
7.2 净化
将7.1所得溶液以约1 mL/min的流速全部过混合型阳离子交换反相吸附固相萃取柱(4.24),依次用3 mL水、3mL 2%甲酸水溶液和2 mL甲醇淋洗,抽干,用5mL 5%氨水甲醇溶液(体积分数)洗脱,洗脱液于40℃下以氮气吹至近干,以0.5 mL甲醇-0.1%甲酸溶液(1+9)溶解,涡动混匀,过0.2 um滤膜(4.25),供液相色谱-串联质谱仪测定。
7.3 空白基质溶液的制备
称取阴性样品10g(精确至0.01g),按7.1和7.2步骤操作。
7.4 测定条件
7.4.1 液相色谱参考条件
a)色谱柱:Acquity UPLC BEH C18,1.7 um,2.1 mm×55mm(内径)或相当者;
b)流动相:A为5 mmol/L乙酸铵溶液(4.15) ,B为0.1%甲酸乙腈(体积分数),梯度洗脱,洗脱程序见表1;
表1 梯度洗脱程序
c)流速:0.25 mL/min;
d)柱温:30℃;
e)进样量:10uL。
7.4.2 质谱参考条件
a)离子源:电喷雾源(HSI),正离子模式;
b)扫描方式:多反应监测(MRM);
c)毛细管电压:1.5kV;
d)源温度:120℃;
e)去溶剂温度:450℃;
f)锥孔气流(氮气):45L/h;
g)去溶剂气流(氮气):700L/h;
h)碰撞气压(氢气):2.20×10-6 Pa;
i)驻留时间:0.20s。
文章来源:《常用兽药残留量检测方法》
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