1 范围

本标准规定了牛奶和奶粉中β-雌二醇残留量气相色谱-负化学电离质谱测定方法。

本标准适用于牛奶和奶粉中β-雌二醇残留量的测定。

本标准的方法检出限：牛奶0.25ug/kg，奶粉2ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 原理

牛奶和奶粉中雌二醇经过酶水解，用乙腈作为蛋白沉淀剂和提取剂进行提取，固相萃取柱净化后，经酰化衍生化后，用气相色谱-负化学电离质谱选择离子监测模式测定，内标法定量。

4 试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 β-葡糖苷酸酶/芳基硫酸苷酶：Helix pomatia，每毫升含β-葡糖苷酸酶100 000单位，每毫升硫酸酚酶≤1000单位。

4.2 甲醇：色谱纯。

4.3 乙腈：色谱纯。

4.4 乙酸乙酯：色谱纯。

4.5 正己烷：色谱纯。

4.6 吡啶：色谱纯。

4.7 异辛烷：色谱纯。

4.8 正丙醇：分析纯。

4.9 衍生化试剂：五氟苯甲酰氯，在避光、防潮环境冷冻储藏。

4.10 碳酸氢钠。

4.11 三水乙酸钠。

4.12 氯化钠。

4.13 0.1％乙酸溶液：移取0.1 mL冰乙酸，用水定容100 mL。

4.14 乙酸钠缓冲液(pH=5.2)：称取43 g三水乙酸钠(4.11)用水溶解，加入25.2 g冰乙酸用水定容至1 000 mL。

4.15 干燥乙酸乙酯：在密封试管中加入500 mg无水硫酸钠和20 mL乙酸乙酯，振荡混合约30 min后，2000r/min离心10 min。

4.16 乙酸乙酯-吡啶(9+1)：将10 mL,吡啶和而mL干燥的乙酸乙酯(4.15)混合，室温保存。

4.17 0.5 mol/L碳酸氢钠(NaHCO₃)溶液：称5g NaHCO₃于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度。

4.18 Oasis HLB固相萃取柱或相当者：60mg, 3mL。使用前分别依次用6 mL甲醇,3mL 0.1％乙酸溶液和3 mL纯水活化，保持柱体湿润。

4.19 标准物质：β-雌二醇，纯度≥99％。

4.20 内标标准物质：β-雌二醇-2,4,16,16-4氘代(β-雌二醇D4)，纯度≥99%。

4.21 β-雌二醇标准溶液：准确称量10 mg标准物质(4.19)分别于100 mL容量瓶中，用甲醇(4.2)定容至刻度，浓度100 ug/mL，储备液储存于-20℃。再以甲醇稀释成适用浓度的溶液，保存于4℃冰箱中。

4.22 内标标准溶液：准确称量10 mg内标标准物质(4.20)分别于100 mL容量瓶中，用甲醇(4.2)定容至刻度，浓度100ug/mL，储备液储存于-20℃。再以甲醇稀释成适用浓度的溶液，保存于4℃冰箱中。

4.23 标准工作溶液：将β-雌二醇标准溶液(4.21)和β-雌二醇D4内标标准溶液(4.22)混合，按照7.3步骤衍生化后备用。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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