北京普天同创生物科技有限公司
5 仪器
5.1 液相色谱仪:配有紫外检测器。
5.2 电子天平:感量为0.01g和0.0001g。
5.3 离心机:最大转速为10000r/min。
5.4 离心管: 50 mL聚丙烯离心管。
5.5 高速涡流混合器。
5.6 振荡器。
5.7 微量移液器:10 uL~100uL和1000 uL~5000uL。
5.8 氮气浓缩仪。
5.9 酸度计:精度为±0.02
5.10 样品过滤器:PTFE, 0.45um。
5.11 固相萃取柱:Bond Elut Certify Ⅱ, 3 mL, 200 mg,或相当者。
5.12 真空固相萃取真空装置。
5.13 超声波仪。
6 试样的制备与保存
6.1 试样的制备
将原料乳和纯奶粉样品分别混合均匀。各自分出0.5 kg作为试样,将分出的试样密封,并作上标记。
6.2 试样保存
将试样置于4℃条件下贮存。
7 分析步骤
7.1 提取
7.1.1 原料乳样品
称取原料乳试样2.00mL,精确到0.01mL放入50 mL聚丙烯离心管中,加入乙酸钾溶液(4.12)5 mL,高速涡旋混合10 s。混合后向样品中加入30 uL乙酸(4.2),调节样品pH至4.5,涡旋混合。再加入70 uL新配制的任葡萄糖苷酸酶溶液(4.3)棍合,于振荡器37℃条件下低速振荡16 h。分别向样品中加入5 mL乙腈,涡旋混合5s,离心10 min(5000r/min)。转移上清液至50 mL离心管中。在原液中加入 5 mL乙腈和1 mL乙酸钾溶液(4.12)涡旋混合5s,离心 10 min(5000r/min),将上清液转移至50 mL离心管中,合并上清液,待净化。
7.1.2 纯奶粉样品
称取纯奶粉0.25 g,精确到0.01g,放入50 mL聚丙烯离心管中加入1.75 g水超声溶解得到复原乳。加入乙酸钾溶液(4.12)5 mL,以下步骤同原料乳样品。
7.2 净化
在混合的上清液中加入5 mL正己烷和50 uL浓盐酸,涡旋混合15s,在5000r/min下离心5 min,弃去正己烷层,重复上述步骤一次。55℃条件下氮吹使其体积小于5 mL。加入磷酸二氢钾缓冲液(4.15)7mL,涡旋混合,超声20 s,5℃条件下以5000r/min离心15 min。采用固相萃取柱(5.11),用3 mL甲醇和3 mL水活化柱,将样品过柱,弃去过柱液,然后用3 mL水和6 mL甲醇洗柱,弃去过柱液。加大真空度抽滤10 min。用2 mL正己烷淋洗柱子两次并弃去淋洗液。用2 mL乙酸-正己烷(4.20)洗涤柱子两次,用15 mL离心管收集洗涤液。在55℃条件下将洗涤液氮吹至干。随后,在每个样品中加入混合流动相(4.9)1mL,涡旋混合5s,超声5s。样液用0.45 um的滤膜过滤到进样瓶中,待测。
7.3 测定条件
7.3.1 液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下:
a)色谱柱:Inertsil DS-3,5 um,250 mm×4.6 mm(内径)或相当者;
b)流速:0.4 mL/min;
c)检测波长:285 nm;
d)柱温:35℃;
e)进样量:20 uL;
f)运行时间:30 min。
7.3.2 液相色谱测定
用氟胺烟酸的标准基质溶液(4.24)分别进样,以峰面积和工作标准溶液浓度绘制标准工作曲线,样品溶液中氟胺烟酸的响应值应在仪器测定的线性范围内。
相关链接:牛奶和奶粉中氟胺烟酸残留量的测定(一)
文章来源:《常用兽药残留量检测方法》
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