6 试样制备与保存

6.1 试样的制备

取不少于500g有代表性的牛奶或奶粉，充分混匀，分为两份，置于样品瓶中，密封，并作上标记。

6.2 试样的保存

牛奶置于4℃冰柜中避光保存，奶粉则于室温下置于干燥器保存。

7 测定步骤

7.1 提取

7.1.1 牛奶

准确称取5g牛奶样品(精确到0.01g)，置于50 mL聚丙烯离心管中，加入一定量的内标溶液(4.22) ,使其浓度为2.0ng/g,再加入10 mL 0.6％甲酸溶液(4.6)，混匀后，置于(47±3)℃振荡水浴中振摇1h；然后先加入3 mL 1.0 mol/L Tris溶液(4.18)，再加入0.3 mL蛋白酶水溶液(4.12)，充分混匀后，置于(47±3)℃振荡水浴中酶解16.h～18h。加入20 mL 0.3 mol/L盐酸(4.10)，振荡5 min,在10℃以5000r/min离心15 min，上清液过滤。

7.1.2 奶粉

取12.5 g奶粉于烧杯中，加适量35℃～50℃水将其溶解，待冷却至室温后，加水至总质量为100 g，充分混匀后准确称取5g样品(精确到0.01g)，置于50 mL聚丙烯离心管中，按7.1.1步骤进行处理。

7.2 净化

将7.1所得溶液以约1 mL/min的流速全部通过Oasis MAX固相萃取柱(4.23)，分别用15 mL乙酸钠-甲醇溶液(4.15)淋洗固相萃取柱，真空抽干15 min。再用5 mL甲醇、3 mL水、5 mL 0.1 mol/L盐酸(4.9)和3 mL甲醇-水溶液(4.16)分别淋洗，真空抽干15 min，然后用2 mL乙酸乙酯淋洗固相萃取柱，弃去全部淋出液，最后用3 mL甲酸-乙酸乙酯溶液(4.5)洗脱喹噁啉2-羧酸和3-甲基喹噁啉-2-羧酸，置于15 mL聚丙烯离心管中，在45℃用氮气浓缩仪吹干。准确加入1.0 mL甲酸-甲醇溶液(4.8)溶解残渣，过0.2 um滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3 空白基质溶液的制备

称取阴性样品5g(精确到0.01g)，按7.1和7.2步骤操作。

7.4 测定条件

7.4.1 液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

a)色谱柱：ODS, 3 um,100 mm×2.1 mm(内径)或相当者；

b)流动相：甲醇、乙腈以及0.1％甲酸溶液(时间梯度见表1);

表1 流动相时间梯度

c)流速：0.2 mL/min;

d)柱温：30℃；

e)进样量：30uL。

7.4.2 质谱参考条件

质谱参考条件如下：

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应检测；

d)分辨率：单位质量分辨率；

e)电喷雾电压：5000V ;

f)雾化气流速：8.0 L/min;

g)气帘气流速：7.0 L/min;

h)辅助气流速：5.0 L/min;

i)离子源温度：450℃；

j)定性离子对、定量离子对及其他质谱参数见表2。

表2 各种化合物的定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞电压、碰撞池出口电压

相关链接：牛奶和奶粉中卡巴氧和喹乙醇代谢物残留量的测定（一）

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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