6 试样制备与保存

6.1 试样的制备

从全部样品中取出有代表性样品约200g，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封后作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

6.2 试样的保存

将蜂王浆试样于-18℃保存。蜂王浆冻干粉试样密封保存，防止吸潮。

7 测定步骤

7.1 提取

称取2g蜂王浆试样(蜂王浆冻干粉取1g)，精确至0.01g，置于50 mL离心管(5.5)中，加入10.0 mL Tris提取液(4.11)，于振荡器上剧烈振荡10 min。以18000g离心力离心10 min，取上清液以小于1.0 mL/min的流速通过Oasis HLB固相萃取柱(4.16)。再加入10.0mL Tris提取液(4.11),于振荡器上剧烈振荡10 min,以18000g离心力离心10 min，取上清液以小于1.0 mL/min的流速通过Oasis HLB固相萃取柱。

7.2 净化

待样液全部流出后，依次用10mL水和10mL甲醇溶液(4.8)洗柱，弃去全部流出液，将固相萃取柱用真空泵减压抽干1h。再用10 mL甲醇(4.2)洗脱于15 mL氮吹管中，用氮气浓缩仪于50℃水浴中吹至近干，准确加入1.0 mL定容液(4.10)后，于超声波清洗仪中溶解残渣。过0.2 um滤膜(4.17)后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3 基质标准混合工作溶液的制备

7.3.1 蜂王浆用基质标准混合工作溶液的制备：分别吸取1.0uL、2.0uL、5.0uL、25uL的林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素标准工作溶液(4.15)，依次加入相对应的阴性样品中，按7.1，7.2步骤制备林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素分别为2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL四个浓度水平的系列基质标准混合工作溶液。

7.3.2 蜂王浆冻干粉用基质标准混合工作溶液的制备：分别吸取1.0uL、2.0uL、5.0uL、25uL林可霉素、红霉素、克林霉素、泰乐菌素、交沙霉素标准工作溶液(4.15)和2.5uL、5.0uL、10.0uL、25uL的替米考星、螺旋霉素、吉他霉素标准工作溶液(4.15)，依次加入相对应的阴性样品中，按7.1，7.2步骤制备林可霉素、红霉素、克林霉素、泰乐菌素、交沙霉素分别为2.0ng/mL、4.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL和替米考星、螺旋霉素、吉他霉素分别为5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL四个浓度水平的系列基质标准混合工作溶液。

7.4 测定条件

7.4.1 液相色谱参考条件

a)色谱柱：Atlantis C₁₈, 3um, 150 mm×2.1mm(内径)或相当者；

b)流动相：A：乙腈，B：0.1％甲酸水溶液，C：甲醇。梯度洗脱条件见表1;

c)流速：0.2mL/min;

d)柱温：30℃；

e)进样量：20uL。

表1 梯度洗脱条件

7.4.2 质谱参考条件

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测；

d)电喷雾电压：5500 V;

e)雾化气压力：0.24 MPa;

f)辅助气流速：0.4 L/min;

g)离子源温度：550℃；

h)碰撞室出口电压：2.0V;

i)定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压：见表2。

表2 林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压

相关链接：蜂王浆和蜂王浆冻干粉中林可霉素、红霉素、克林霉素、吉他霉素、交沙霉素残留量的测定（一）

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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