北京普天同创生物科技有限公司
胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯(红色)水解为乙酸与靛酚(蓝色),有机磷或氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用,使催化、水解、变色的过程发生改变,由此可判断出样品中是否有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药,可做定性检测。
本法摘自GB/T 5009.199—2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测,适用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速筛选测定。
1.测定方法
(1)整体测定法 选取有代表性的蔬菜样品,擦去表面泥土,剪成1cm见方的碎片,取5g放人带盖瓶中,加入10mL缓冲溶液,振荡50次,放置2min以上。
取一片速测卡,用白色药片沾取提取液,放置10min以上进行预反应,有条件时放在37℃恒温装置中10min,预反应后的药片表面必须保持湿润。将速测卡对折,用手捏3min或用恒温装置恒温3min,使红色药片与白色药片叠合发生反应。每批测定设一个缓冲液的空白对照卡。
②表面测定法(粗筛法) 擦去蔬菜表面的泥土,滴2~3滴缓冲溶液在蔬菜表面,用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。取一片速测卡,将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。放置10min以上进行预反应,有条件时放在37℃恒温装置中10min,预反应后的药片表面必须保持湿润。将速测卡对折,用手捏3min或用恒温装置恒温3min,使红色药片与白色药片叠合发生反应。每批测定设一个缓冲液的空白对照卡。
2.结果判定
结果以酶被有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制(为阳性)或未抑制(为阴性)表示。白色药片不变色或略有浅蓝色为阳性结果。白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同,为阴性结果。阳性结果样品可以用其他方法进一步确定具体农药品种和含量。
3.注意事项
①韭菜、生姜、葱、蒜、辣椒、胡萝卜等蔬菜中,含有破坏酶活性或使蓝色产物褪色的物质,处理这类样品时不要剪得太碎,浸提时间不要太长,必要时可用整株蔬菜浸提的方法。
②当温度低于37℃时,酶反应速度放慢,药片加液后放置,反应的时间应相对延长,延长时间以空白对照卡用手捏3min时可变色为准。
③空白卡如果不变色,原因一是由于药片表面缓冲溶液过少,药片表面不够湿润,二是由于温度太低。
④白色和红色药片叠合时间以3min为准,3min后蓝色会逐渐加深,24h后颜色会逐渐褪去。
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