1 范围

本标准规定了出口强化蜂王浆及干粉中维生素B₆检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。

本标准适用于出口强化蜂王浆及干粉中维生素B₆的测定。

2 抽样和制样

2.1 检验批

鲜王浆以不超过300kg为曲检验批。王浆冻于粉以不超过100 kg为一检验批。

同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、产地、规格和等级等。

2.2 抽样方式和数量

每批抽样不少于3箱，每箱取60 g，若从冷库中取出鲜王浆，需经解冻，干粉需升温至室温取样，共约180 g，作为原始样品。

注：车间取样(仅限鲜蜂王浆)，以每个拼配锅为一个生产批号作为取样单位。但不得超过300 kg，抽取样品不超过500 g,充分混匀后，密封保存。

2.3 试样制备

从每袋原始样品中取出部分有代表性样品，充分混匀，用四分法缩分出不少干50 g试样。装入清洁容器内，加封后，标明标记，送实验室作检验样。

2.4 样品保存

将样品于-18℃以下冷冻保存。

注：在抽样及制样过程中，必须防止样品受到污染或发生含童的变化。

3 测定方法

3.1 方法提要

试样用10％偏磷酸提取，沉淀样品中的蛋白质，离心，取上清液，用高效液相色谱仪测定，外标法定量。

3.2 试剂和材料

除特殊规定外，试剂均为分析纯、

3.2.1 乙腈：液相色谱专用。

3.2.2 偏磷酸(HPO3)。

3.2.310％偏磷酸水溶液：称取10g偏磷酸(HPO3)溶于水中，用水稀释定容至100 mL。

3.2.4 磷酸二氢钾(KH₂PO₄)。

3.2.5 0.03 mol/L磷酸二氢钾水溶液：称取4.0824g磷酸二氢钾(KH₂PO₄)溶干水中，用水稀释定容至100 mL。

3.2.6 维生素B₆标准品：吡哆醇，生物标准品，纯度大于99％。

3.2.7 维生素B₆标准储备液：称取100 mg维生素B₆溶于水中，用水稀释定容至100 mL。该液1mL相当于1 mg维生素B6。保存于4℃冰箱中。

3.2.8 维生素B₆标准工作液：吸取维生素B6标准储备液1.0 mL，用水稀释定容至100 mL。该液1 mL相当于10 ug维生素B₆。保存于4℃冰箱中。

3.3 仪器和设备

3.3.1 高效液相色谱仪，配有荧光检测器。

3.3.2 旋涡混匀器或超声波提取仪。

3.3.3 离心机。

3.3.4 50mL容量瓶。

3.3.5 微量进样器，10 uL。

3.4 测定步骤

3.4.1 样品处理

准确称取有代表性的均匀样品约0.5g(精确到0.0001g)，于50mL容量瓶中，加25 mL 10％偏磷酸，在旋涡混匀器或超声波提取器上提取5 min，用水稀释定容至刻度，摇匀。取部分溶液离心。取上清液用水稀释至适当浓度，作高效液相色谱测定用。

3.4.2 液相色谱测定

3.4.2.1 液相色谱条件

a)色谱柱：ODS-C₁₈柱(4.0mm×250mm)。

b)流动相：0.03mol/L 磷酸二氢钾／乙腈(80+20，以稀磷酸调至pH2.3)。

c)流速：1.0 mL/min。

d)检测器：荧光检测器，Ex 290 nm，Em 390 nm。

3.4.2.2 维生素B₆色谱图

图1 维生素B₆色谱图

3.4.2.3 色谱测定

对标准工作溶液和样液等体积穿插进样2 uL测定。在上述色谱条件下，维生素B₆保留时间约为4.0 min。

3.4.3 空白试验

除不加试样外，按上述测定步骤进行。

3.4.4 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中维生素B₆含量：

式中：X—维生素B₆含％;

H_sp—样液中维生素B₆的峰高,mm;

H_st—标准工作溶液中维生素B₆的峰高，mm;

c—标准工作溶液中维生素B₆的浓度，ug/mL;

m—称取的试样量，g；

A—稀释倍数；

V—称样时的定容体积，mL。

注：计算结果需要扣除空白值。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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