1 范围

本标准规定了进出口蜂蜜中脯氨酸含量的分光光度测定方法。

本标准适用于进出口蜂蜜中脯氨酸含量的测定。

2 测定方法

2.1 方法提要

蜂蜜中的脯氨酸与茚三酮作用生成棕色络合物，用分光光度计在波长510 nm处测定其吸光度，用标准曲线法定量。

2.2 试剂

除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2.2.1 甲酸。

2.2.2 异丙醇溶液：量取50 mL异丙醇加水稀释至100 mL。

2.2.3 茚三酮-乙二醇甲醚溶液：称取3g茚三酮溶于100 mL的乙二醇甲醚中(乙二醇甲醚：又称溶纤剂，CH₃OCH₂CH₂OH；Methyl cellosolve)。

2.2.4 脯酸酸标准品：纯度≤99％。

2.2.5 脯氨酸标准储备液：精确称取0.0250g脯氨酸标准品用水溶解并定容至100mL。此溶液每毫升相当于250 ug的脯氨酸。

2.2.6 脯氨酸标准工作液：准确移取1mL脯氨酸标准储备液于10mL容量瓶中，用水定容，此溶液每毫升相当于25 ug的脯氨酸。

2.3 仪器

分光光度计。

2.4 测定步骤

2.4.1 标准曲线绘制：准确吸取脯氨酸标准溶液0.0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL(相当于0,5,10,15,20,25ug脯氨酸)，分别移入具塞试管中，加水补充体积到1mL，分别加入0.25 mL甲酸和1.0mL茚三酮-乙二醇甲醚溶液。盖紧瓶塞，在沸水浴中加热15 min，取出，移入70℃恒温水浴中继续发色10 min。加入5 mL异丙醇溶液，放置5 min后，在波长510 nm处以试剂空白调节零点，测定吸光度，绘制标准曲线。

2.4.2 测定

称取5g试样(精确至0.1g)，用水溶解后定量地移入100 mL容量瓶中，并加水稀释至刻度，充分。摇匀。准确吸取样品溶液(0.5～1.0)mL，移入具塞试管中，加水补充至体积1 mL后，按标准曲线绘制中同样步骤操作，测定吸光度，并从标准曲线上查得脯氨酸的含量。

2.5 结果计算和表述

式中：X—样品中脯氨酸含量，mg/kg ;

A—测定用样液中脯氨酸的含量，ug；

m—样品质量，g；

V₂—测定用样液中的体积，mL；

V₁—样品溶液的总体积，mL。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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