北京普天同创生物科技有限公司
4.2 叶绿素含量测定
4.2.1 方法原理
以丙酮提取试样中的叶绿素,用乙醚分层,硫酸钠溶液洗涤净化,于642 nm及确0 nm波长下比色法定量。
4.2.2 试剂
除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水。
4.2.2.1 碳酸钙。
4.2.2.2 石英砂:试剂级。
4.2.2.3 丙酮。
4.2.2.4 无水硫酸钠:(650℃灼烧4 h)。
4.2.2.5 乙醚。
4.2.2.6 丙酮-水溶液:(85+1.5, V/V)。
4.2.2.7 硫酸钠水溶液:(2%,m/V)。
4.2.3 仪器设备。
4.2.3.1 分光光度计。
4.2.3.2 玻璃研钵:1.00 mL。
4.2.3.3 G3玻璃砂芯漏斗。
4.2.3.4 分液漏斗:250 mL。
4.2.3.5 棕色容量瓶:50 mL。
4.2.3.6 移液管:10 mL、20mL。
4.2.4 分析步骤
4.2.4.1 提取
称取试样约0.2g(精确到0.0001g),置于100 mL玻璃研钵中,加碳酸钙约0.2g及石英砂约0.5g,小心研磨5 min,加入2 mL丙酮-水溶液(4.2.2.6)继续研磨至干粉状;将研磨物全部转入G3玻璃漏斗,缓缓抽滤,继续用丙酮-水溶液(4.2.2.6)少量反复洗涤研钵并转移至漏斗内,至近无色,抽干;将漏斗内残渣重新倒回研钵中,加少量丙酮继续研磨1 min,再转入漏斗中,抽滤,至滤液接近无色(约需30 mL~35 mL丙酮-水溶液)。
4.2.4.2 分离净化
将滤液全部转入内盛50 mL 2%硫酸钠溶液的250 mL分液漏斗中,用20 mL乙醚分次洗涤抽滤瓶,并入分液漏斗中,振摇1 min,使分层;水层放入另一分液漏斗中,加10 mL乙醚萃取,弃去水层;有机层并入第一个分液漏斗中,用水洗涤两次,每次20 mL,弃去水层。将乙醚层通过一装有5g无水硫酸钠的小漏斗滤入50 mL棕色容量瓶中,用少量乙醚洗涤分液漏斗,并洗去无水硫酸钠层中的色素,定容、摇匀,待用。
4.2.4.3 测定
取上述溶液10 mL~20 mL到50 mL棕色容量瓶中,用乙醚定容,摇匀,立即于分光光度计上测定642 nm及660 nm处的吸光值,1 cm比色皿,用乙醚作空白。
4.2.5 结果计算
按下式(5)、式(6)计算试样中的总叶绿素质量分数含量:
式中:
X5—样液中总叶绿素的含量,单位为毫克每升(mg/L) ;
A—相应波长处(660 nm, 642 nm)测得吸光值;
X6—试样中总叶绿素的质量分数,单位为毫克每100克(mg/100g) ;
V—提取液的总体积,单位为毫升(mL);
F—试样稀释倍数;
m—试样质量,单位为克(g)。
测定结果取平行试验结果的算术平均值,保留小数点后第一位。
平行试验允许误差(相对)不大于3%。
文章来源:《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》
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