1 范围

本标准规定了进出口油菜籽及其饼粕中硫代葡萄糖苷总量的测定方法。

本标准适用于油菜籽及其饼粕中硫代葡萄糖苷总量的测定。

2 测定方法

2.1 方法提要

样品加热使自然态酶灭活，经沸水提取后，用弱阴离子交换树脂柱层析净化，添加黑芥子硫苷酸酶水解硫代葡萄糖苷得到葡萄糖并用水洗脱。加入葡萄糖显色试剂，使样品溶液呈色，在505 nm波长测定吸光度。根据葡萄糖标准曲线校正，计算样品中硫代葡萄糖苷总量。

2.2 试剂和材料

除另有规定外，试剂为分析纯，水为蒸馏水：

2.2.1 无水磷酸氢二钠。

2.2.2 氯化钠。

2.2.3 钨酸钠。

2.2.4 苯酚。

2.2.5 浓盐酸。

2.2.6 弱阴离子交换树脂，DEAE Sephadex A-25。

2.2.7 氢氧化钠。

2.2.8 冰乙酸。

2.2.9 无水乙酸钠。

2.2.10 三羟甲基氨基甲烷。

2.2.11黑芥子硫苷酸酶(EC 3.2.1.147)，活力单位200 U/g。

2.2.12 4-氨基安替吡啉。

2.2.13 葡萄糖氧化酶(EC 1.1.3.4)，活力单位20 000 U/66.67mg。

2.2.14 过氧化物酶(EC 1.11.1.7)，活力单位10 000 U/52.6 mg。

2.2.15 盐酸溶液(2 mol/L)：量取17.2 mL浓盐酸倒入100 mL水中。

2.2.16 苯酚-钨酸溶液：称取5.0g钨酸钠、5.0g无水磷酸氢二钠和9.0g氯化钠于500 mL容量瓶中，用约350 mL水溶解，用2 mol/L盐酸溶液调节pH至3.0，加入2.0g苯酚，用水定容至500 mL。

2.2.17 氢氧化钠溶液(0.5 mol/L)：称取20 g氢氧化钠溶解于约800 mL水中，以水定容至1L。

2.2.18 乙酸钠缓冲液(0.2 mol/L)：称取16.5 g无水乙酸钠和11.5 mL冰乙酸溶解于约950 mL水中，用2 mol/L盐酸溶液调节pH至4.9，用水定容至1L。

2.2.19 Tris-HCI缓冲液：称取1.6g三羟甲基氨基甲烷溶解于约900 mL水中，用2 mol/L盐酸溶液调节pH至7.0，用水定容至1L。

2.2.20 黑芥子硫苷酸酶溶液：称取500 mg黑芥子硫苷酸酶于10 mL容量瓶中，加水溶解并定容，实验当日制备。

2.2.21 葡萄糖显色溶液：称取10 g无水磷酸氢二钠于盛有约750 mL水的1L容量瓶中，加入131.7 mg葡萄糖氧化酶于容量瓶中并摇匀；称取16.7mg过氧化物酶和333 mg 4-氨基安替吡啉于盛有约10 mL水的烧杯中并搅拌使其溶解，移入容量瓶并用水定容；溶液保存在棕色瓶中并于4℃冷藏。

2.2.22 苯甲酸。

2.2.23 无水葡萄糖标准品：纯度≥99％。

2.2.24 葡萄糖标准储备液：将无水葡萄糖于40℃真空烘箱中干燥4h。冷却后称取1.0000g葡萄糖于烧杯内，加入1 g苯甲酸防腐，用水溶解并转移至1L容量瓶内，用水稀释定容。葡萄糖储备液中葡萄糖浓度为5.56 umol/mL。

2.2.25 试管：13 mm×100 mm，具有螺旋盖。

2.2.26Poly-prep层析柱：称取0.1g(准确至0.001g)DEAE Sephadex A-25树脂装填入Poly-prep层析柱。柱下装好活塞，使活塞处于关闭。在每支层析柱上沿柱壁加入10 mL水，打开活塞，使约2 mL水流过柱的填充料部分。关上活塞，将层析柱加盖，放置过夜，使层析柱内填充物膨润。打开活塞，依次用下列溶液淋洗层析柱使其活化：5 mL 0.5mol/L氢氧化钠溶液、10 mL水、5 mL乙酸钠缓冲液、10 mL水，并使排干。关上活塞，将柱加盖准备加入样品。

2.2.27 Poly-prep柱双向活塞。

2.2.28 层析柱盖帽。

2.2.29 容量瓶，10 mL。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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