3.3 仪器和设备

3.3.1 液体闪烁分析仪。仪器操作条件：机器运行时，环境温度为15～30℃，相对湿度为30％～80％。确定本仪器地点远离所有的放射源。

3.3.2 纹碎机：电动。

3.3.3 低温离心机：不低于8000r/min。

3.3.4 水浴锅：恒温温度(40±1)℃。

3.3.5 电磁搅拌器。

3.3.6 微量注射器：50～200uL。

3.3.7 低钾闪烁瓶。

3.3.8 试管：75 mm × 16 mm，带磨口玻璃塞。

3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取4g试样(精确至0.1g)，置于洁净的50 mL具塞的锥形瓶中，加入0.8 mL氢氧化钠溶液(3.2.11)及10 mL 二氯甲烷，加盖振摇20 min，于3500r/min离心10 mm，弃去上层氢氧化钠层并分离出二氯甲烷层。于残渣中再加10 mL 二氯甲烷，重复上述操作。合并两次二氯甲烷层，加入5 mL水，振摇1 min后于3500r/min离心10 min，弃去水层，将提取液置40℃水浴中以氮气流吹至近干。用2 mL甲醇水溶液溶解残留物，将溶液注入C₁₈净化柱，用约10 mL水淋洗，弃去流出液。用10 mL冰乙酸-乙醇溶液(3.2.10)进行洗脱，收集10 mL洗脱液于试管中。置40℃水浴中以氮气吹至近干。临测定前加入1 mL甲醇-磷酸盐-明胶缓冲液溶解残渣作为最终样液，供液体闪烁分析仪测定。

3.4.2 标准曲线的绘制

取18只试管并编号，按下述操作过程制备。

1号、2号管作为测量总T数用。分别加入700 uL磷酸盐-明胶缓冲液(3.2.4)和50 uL雌二醇氚标记物(3.2.20)后，于4℃静置12 h。

3号、4号管作为测量非特异结合率(NSB)用。分别依次加入300uL磷酸盐-明胶缓冲液(3.2.4)和50 uL雌二醇氚标记物(3.2.20)后，于4℃静置12h，加入400uL分离剂。

3号、6号管作为测量特异结合率(B0)用。分别依次加入100uL磷酸盐-明胶缓冲液(3.2.4),200 uL雌二醇抗血清和50uL雌二醇氚标记物(3.2.20)后，于4℃静置12 h，加入400 uL分离剂。

7～18号管作为标准溶液管用。选10,20,50,100,200,400pg/100uL六个浓度标准工作液，每个浓度用两管。分别依次加入100uL标准工作溶液、200uL 雌二醇抗血清和50uL雌二醇氚标记物(3.2.20)后，于4℃静置12 h，加入400 uL分离剂。

以上各管静置30 min后以3500r/min离心20 min，吸取每管全部上清液，放入闪烁瓶内，加入10 mL闪烁液，静置3h后，在液体闪烁分析仪上测定放射性计数。

总T表示标记物在本次实验中的浓度，该浓度应和样液中被测物浓度保持同一水平，如偏离太远，应适当调节试液浓度。
按式(1)计算B/B₀值：

式中：B/B₀—结合率，％；

B—标准工作液各浓度双管计数均值；

B₀—特异结合双管(即5号、6号管)计数均值；

NSB—非特异结合双管(即3号、4号管)计数均值。

求得B/B₀(％)值后，以此为纵坐标，各标准工作液浓度为横坐标，在半对数坐标纸上绘制标准曲线。

3.4.3 样液测定

取2只试管编号，于每只试管中分别依次加入100 uL最终样液、200 uL雌二醇抗血清及50uL，雌二醇氚标记物(3.2.20)后，于4℃静置12h，加入400 uL分离剂，以下操作方法与制作标准曲线相同。根据液体闪烁分析仪测定的数据，求得B/B0(％0)值，再从标准曲线上查出样液中雌二醇的浓度。

3.4.4 空白试验

使用经脱激素肉样，按上述测定步骤进行操作。

3.5 结果计算和表述

按式(2)计算试样中雌二醇残留含量：

式中：X—试样中雌二醇残留含量，ug/kg;

c—从标准曲线上查得样液中雌二醇浓度，ng/mL;

V—样液最终体积，mL;

m—所称试样量，g。

注：计算结果应扣除空白值。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.05 ug/kg。

4.2 回收率

牛肉中雌二醇添加浓度及其回收率的实验数据：

在0.05 ug/kg时，回收率为84.4％；

在0.10 ug/kg时，回收率为92.3％；

在0.50 ug/kg时，回收率为101.2％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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