北京普天同创生物科技有限公司
1 范围
本标准规定了动物源食品中甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于虾、鱼、禽肉、肠衣和蜂蜜中甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量的检测。
2 测定方法
2.1 方法提要
在碱性条件下用乙酸乙酯提取样品中甲砜霉素、氟甲砜霉素,正己烷脱脂,C18固相萃取小柱净化,液相色谱-串联质谱测定和确证,外标法定量。
2.2 试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水。
2.2.1 乙酸乙酯:高效液相色谱级。
2.2.2 正己烷:高效液相色谱级。
2.2.3 甲醇:高效液相色谱级。
2.2.4 氯化钠。
2.2.5 无水硫酸钠:650℃灼烧4h,在干燥器内冷却至室温,贮于密封瓶中备用。
2.2.6 氨水:25%~28%。
2.2.7 1500氯化钠水溶液:15 g氯化钠溶解于100 mL水中。
2.2.8 乙酸乙酯:氨水(97:3,体积比)。
2.2.9 甲砜霉素标准品(thiamphenicol, CAS NO.15318-453,C12H15Cl2NO5S):纯度大于等于99%。
2.2.10 氟甲砜霉素标准品(florfenicol,CAS NO.76639-94,C12H15Cl2NO5S):纯度大于等于99%。
2.2.11 甲砜霉素标准储备溶液:称取0.0100g甲砜霉素标准品,用甲醇溶解定容至100 mL,溶液浓度为100 ug/mL。1℃~4℃冷藏保存。
2.2.12 氟甲砜霉素标准储备溶液:称取0.0100g氟甲砜霉素标准品,用甲醇溶解定容至100 mL,溶液浓度为100 ug/mL。1℃~4℃冷藏保存。
2.2.13 混合标准工作溶液:临用前根据需要用甲醇,水(1:1,体积比)稀释至适当浓度作为混合标准工作液,1℃~4℃冷藏保存。
2.3 仪器和设备
2.3.1 液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源。
2.3.2 旋转蒸发器。
2.3.3 粉碎机。
2.3.4 均质器。
2.3.5 旋涡混合器。
2.3.6 固相萃取柱:C18固相萃取小柱,500 mg,或相当者。甲醇和水各5 mL预洗。
2.3.7 无水硫酸钠柱:80 mm×40 mm(内径)筒形漏斗,底部垫5 mm脱脂棉,再装50 mm无水硫酸钠。
2.4 测定步骤
2.4.1 制样
a)虾、鱼、禽肉、肠衣:从所取全部虾、鱼或禽肉样品中取出有代表性样品约500 g,用粉碎机粉碎;从所取肠衣样品中取出有代表性样品约300 g,用剪刀剪碎,混合均匀,均分成两份,分别装入洁净容器作为试样,密封,并标明标记。将试样于-18℃冷冻保存。
b)蜂蜜:取500 g代表性蜂蜜样品,未结晶的样品将其用力搅拌均匀,有结晶析出的样品可将样品瓶盖塞紧后,置于不超过60℃的水浴中温热,等样品全部熔化后搅匀,迅速冷却至室温。在熔化时应注意防止水分挥发。制备好的试样均分成两份,分别装入样品瓶中,密封,并标明标记。将试样室温下保存。在抽样和制样的操作过程中,应防止样品污染或发生残留物含量的变化。
2.4.2提取
a)虾、鱼、禽肉:称取5 g试样(精确到0.01 g)置于50 mL具塞离心管中,加25 mL碱性条件下乙酸乙酯(2.2.8),在均质器中以14 000 r/min均质30 s,以3 000 r/min离心5 min,将上层乙酸乙酯提取液过无水硫酸柱,收集于浓缩瓶中,样品残渣再加入20 mL碱性条件下乙酸乙酯(2.2.8),重复上述操作,合并乙酸乙酯提取液.在50℃以下水浴减压浓缩至近干,用4 mL正己烷和4mL水依次将残渣转移至10 mL具塞玻璃离心管中,于旋涡混合器上以2 000 r/min,混匀1 min,以2000 r/min离心3 min,弃去上层正己烷溶液,再加入4 mL正己烷,重复上述操作。
b)肠衣:称取 5g试样(精确到0.01g)置于50 mL具塞离心管中,加25 mL碱性条件下乙酸乙酯(2.2.8),于旋涡混合器上以2 000 r/min,混匀1 min,按上述方法操作。
c)蜂蜜:称取59试样(精确到0.01g)置于50 mL具塞离心管中,加15 mL 15%氯化钠水溶液,加25 mL碱性条件下乙酸乙酯(2.2.8),于旋涡混合器上以2000r/min,混匀1 min,以3 000 r/min离心5 min,将上层乙酸乙酯提取液过无水硫酸钠柱,收集于浓缩瓶中,样品残渣再加入20 mL碱性条件下乙酸乙酯(2.2.8),重复上述操作,合并乙酸乙酯提取溶液,在50℃以下水浴减压浓缩至近干。用4 mL水溶解残渣。
2.4.3 净化
将水层转移至C18固相萃取柱,再用10 mL水分两次洗涤,洗涤液过C18固相萃取柱,弃去流出液,负压抽干,用6mL,甲醇洗脱,收集全部洗脱液,用水定容至10.0 mL,供液相色谱-串联质谱仪测定。
文章来源:《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》
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