1 范围

本标准规定了畜、禽分割肉、盐渍肠衣和蜂蜜中敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量的制样和液相色谱-质谱/质谱检验方法。

本标准适用于分割肉、盐渍肠衣和蜂蜜中敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量的测定。

2 试样的制备与保存

分割肉：取样品中有代表性的约500 g，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于-18℃冰箱内保存。

肠衣：取有代表性样品约100 g，用剪刀剪碎至2 mm以下，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于-18℃冰箱内保存。

蜂蜜：取有代表性样品约500 g,搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识，于-18℃冰箱内保存。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

3 方法提要

试样中的敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷用二氯甲烷或乙酸乙酯提取，提取液经浓缩、脱脂后，用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标峰面积法定量，子离子丰度比定性。

4 试剂和材料

所有试剂除特殊注明外，均为分析纯，水为二次蒸馏水。

4.1 乙腈：高效液相色谱级。

4.2 甲醇：高效液相色谱级。

4.3 乙酸乙酯。

4.4 二氯甲烷。

4.5 环己烷。

4.6 硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。

4.7 乙酸铵：优级纯或相当者。

4.8 50 mmol/L 乙酸铵溶液：称取0.385g乙酸铵溶于1 000 mL水中。

4.9 敌百虫(Trichlorfor,CAS号：52-68-6，分子式：C₄H₈Cl₁₃O₄P)标准品：纯度大于或等于98.0％。

4.10 敌敌畏(Dichlorvos, CAS号：62-73-7，分子式：C₄H₇Cl₂O₄P)标准品：纯度大于或等于97.6％。

4.11 蝇毒磷(Coumaphos,CAS号：56-72-4，分子式：C₁₄H₁₆ClO₅PS)标准品：纯度大于或等于99.9％。

4.12 标准储备液：分别准确称取适量敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷标准品，用甲醇配制成浓度为100 ug/mL浓度的混合标准储备液。此溶液在0℃～4℃冰箱中避光保存，可使用3个月。

4.13 空白样品提取液：用不含敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷残留的样品，按照6.1制备空白样品提取液。

4.14 标准工作溶液：根据需要用空白样品提取液将标准储备液稀释成50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、500 ng/mL的混合标准工作溶液。置于0℃～4℃冰箱中避光保存，可使用3 d。

5 仪器和设备

5.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：三重四极杆质谱检测器，配电喷雾离子源(EST)或相当者。

5.2 超声波清洗器。

5.3 旋涡混匀器。

5.4 旋转蒸发仪。

5.5 离心机：5000r/min。

5.6 均质器。

5.7 0.45 um微孔滤膜。

6 测定步骤

6.1 提取与净化

6.1.1 分割肉

a)准确称取5g均匀试样(精确到0.01g)于50 mL具塞试管中，加入5g无水硫酸钠混匀，再加入15 mL二氯甲烷，用均质器(10000r/min)均质2 min,4000 r/min离心3 min，将有机相转移至100 mL梨形蒸馏瓶中，残渣再用2×10 mL二氯甲烷均质提取两次。

b)离心合并有机相，于40℃旋转蒸发至2 mL，将样液转移至5 mL刻度试管中，并用少量二氯甲烷洗涤梨形蒸馏瓶，合并洗涤液到刻度试管中，室温通氮浓缩至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解残渣，加入2 mL环己烷旋涡混匀2 min后，2500r/min离心3 min，将下层乙腈相过0.45 um微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

6.1.2 肠衣

准确称取5g试样(精确到0.01g)于50 mL 具塞离心瓶中，加入2 g无水硫酸钠混匀，再加入15 mL二氯甲烷，盖上盖混匀，置于超声波清洗器中超声30 min，冷却后将有机相过滤转移至100 mL梨形蒸馏瓶中，残渣再用2×10 mL用二氯甲烷混匀超声提取两次，离心合并有机相。接下来按照6.1.1中b)的步骤进行。

6.1.3 蜂蜜

称取5g试样(精确到0.01g)置于50 mL具塞离心管中，加10 mL水，加25 mL乙酸乙酯，于旋涡混合器上混匀1 min，以3000r/min离心5 min，将上层乙酸乙酯提取液收集于浓缩瓶中，残渣再加入20mL乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯提取溶液。在50℃以下减压浓缩至约 3 mL后转移至离心管，用5 mL乙酸乙酯分两次洗涤浓缩瓶，合并洗涤液于离心管中，用氮气吹干干。加1.0 mL乙腈溶解残渣，并过0.45 um微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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