5 仪器和设备

5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾(ESI)离子源。

5.2 涡旋混合器。

5.3 离心机：转速≥4000r/min。

5.4 旋转蒸发器。

5.5 感量天平(0.1mg和0.01g)。

5.6 超声波发生器。

5.7 恒温箱。

5.8 真空过柱装置。

5.9 吹氮浓缩装置。

5.10 粉碎机。

6 测定步骤

6.1 提取

称取10 g(精确至0.1g)试样，于50 mL塑料离心管中，加入20 mL pH为5.2的乙酸铵缓冲溶液(4.10)，在2000r/min下涡旋混合2 min。添加200.0 uL同位素内标物(4.17)于待测样品中。加50 uL的β-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶，加盖后超声提取15 min。在恒温箱中于37℃酶解16h。以3800r/min离心 10 min后，将上清液过0.45 um滤膜(4.21)取5 mL滤液于10 mL带刻度的玻璃试管。

6.2 净化

将C₁₈小柱(4.19)和SCX (4.20)小柱按从上到下的次序装好。依次用5 mL水、5 mL甲醇和5 mL 0.03 mol/L盐酸(4.12)溶液以1.0 mL/min的流速过柱活化。转移过滤后的提取液至固相层析柱的顶部，以0.5 mL/min流速过固相层析柱，此步操作至少需要10 min。用5 mL水、5 mL甲醇淋洗小柱，在较强的负压下抽10 min。取下C₁₈小柱。用12 mL混合均匀的乙酸乙酯-氢氧化铵溶液(4.11)，洗脱SCX柱子上的待分析成分并收集洗脱液，并在吹氮浓缩装置上于40℃±5℃的温度下蒸干。加入1.0 mL乙腈＋水(1+9)振荡溶解残渣后过0.45 um滤膜。滤液供液相色谱-质谱测定。

6.3 测定

6.3.1 高效液相色谱条件

a)色谱柱：C₁₈柱，150 mm(柱长)×2.1 mm(内径)，粒度5 um;

b)流动相：A：乙腈＋0.1％甲酸，B: 2 mmol/L乙酸铵水溶液+0.1％甲酸；流速：200 uL/min，梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序表

c)柱温：35℃；

d)进样量：30 uL。

6.3.2 质谱条件

a)离子源：电喷雾ESI，正离子；

b)扫描方式：多反应监测MRM;

c)雾化气压力(GS1)、气帘气压力(CUR)、辅助气流速(GS2)均为高纯氮气或其他合适气体；使用前应调节各气体流量以及离子源温度(TEM)使质谱灵敏度达到检测要求；

d)电喷雾电压(IS)、碰撞电压(CE)、去簇电压(DP)、碰撞室入口电压(EP)、碰撞室出口电压(CXP)应优化至最佳灵敏度；

6.3.3 定量测定

根据试样中被测物的药物含量，选取响应值相近的标准工作液(4.18)同时进行分析。标准工作液和待测液中四种药物的响应值均应在仪器线性响应范围内。如果含量超过标准曲线范围，应用乙腈＋水(1+9)稀释到合适浓度后分析。在上述色谱条件下的待测药物的参考保留时间分别为3.0 min(沙丁胺醇),3.1 min(特布它林),9.4 min(莱克多巴胺)和9.9 min(克伦特罗)。

6.3.4 定性测定

按照液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品一致，定性离子对的相对丰度，是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。

表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

6.4 空白试验

除不加试样外，均按上述操作步骤进行。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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