7 测定步骤

7.1 提取

称取5g试样(精确至0.01g)，置于50 mL聚丙烯离心管中，加入20 mL甲酸＋甲醇＋乙腈混合溶剂(4.6)，以均质器于10000r/min均质提取30 s，4000r/min离心5 min，上清液转移至一支50 mL比色管中。另取-50 mL聚丙烯离心管加入15 mL甲酸+甲醇＋乙腈提取液(4.6)，洗涤均质器刀头10 s，洗涤液移入前一离心管中，用玻棒搅动残渣，旋涡振荡提取1 min，超声波振荡提取5 min，4000r/min离心5 min，合并上清液至50 mL比色管，残渣再加入15 mL上述提取液，旋涡振荡提取1 min, 4000r/min离心5 min，合并上清液至50 mL比色管，以上述提取液定容至50.0 mL，摇匀后取10. 0 mL置于一洁净玻璃离心管中，于35℃下水浴氮吹至近干，加入1 mL 5％甲醇水溶液(4.8)，旋涡振荡30 s，待净化。

7.2 净化

在7.1的提取液中加入1 mL正己烷，振荡后弃去正己烷层，下层溶液以约1 mL/min的流速全部过C₁₈固相萃取小柱，再以2×3 mL 5％甲醇水溶液(4.8)洗涤离心管后淋洗固相萃取小柱，继续抽干约10 min,以3 mL甲醇洗脱，35℃下氮吹至近干，以0.1％甲酸水溶液＋乙腈溶液(4.7)定容至1 mL，过0.22 um滤膜，供测定。

7.3 测定

7.3.1 色谱条件

a)色谱柱：YMC-Pack ProC₁₈柱，5um,150×3.0 mm(内径)，或相当者；

b)柱温：30℃;

c)流动相：0.1％甲酸溶液+乙腈(7+3，体积比)；

d)流速：400 uL/min;

e)进样量：10 uL。

7.3.2质谱条件：

a)离子源：电喷雾源(ESI)，正离子模式；

b)扫描方式：多反应监测(MRM);

7.3.3 液相色谱-质谱/质谱测定

根据试样中被测物的含量情况，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析。标准工作液和待测样液中座赛多药物的响应值应在仪器线性响应范围内。标准工作液与待测样液等体积进样。上述色谱条件下，喹赛多的参考保留时间为2.5 min。

7.4 定性标准

7.4.1 保留时间

待测样品中化合物色谱峰的保留时间与标准溶液相比变化范围应在±2.5％之内。

7.4.2 信噪比

待测化合物的定性离子的多反应监测(MRM)色谱峰的信噪比应大于等于3(S/N≥3)，定量离子的多反应监测(MRM)色谱峰的信噪比应大于等于10(S/N≥10)。

7.4.3 定量离子、定性离子及子离子丰度比

待测化合物的质谱定性离子应出现至少应包括一个母离子和两个子离子，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过表1规定的范围。

表1 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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