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动物源性食品中二苯乙烯类激素残留量检测方法(一)

发布时间:2019-06-06 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:433

1 范围

本标准规定了动物源性食品中二苯乙烯类激素残留量检验的酶联免疫测定方法。

本标准适用于鸡肉、鱼肉、虾肉及鸡肝中己烷雌酚己烯雌酚残留量的检测。

2 试样的制备和保存

2.1 试样的制备

从所取全部样品中取出有代表性样品约1 kg,充分搅碎,混匀,采用四分法,将样品分成两等份,装入洁净容器,加封并做标识。

2.2 试样的保存

试样放置-20℃~-18℃条件下保存。

3 测定方法

3.1 方法提要

本方法的测定基础是竞争性酶联免疫反应。酶标板上已包被的雌酚抗体,可与己烷雌酚,己烯雌酚发生交联反应,标准液或样品中的雌酚与辣根过氧化酶标记的雌酚抗原共同争夺雌酚抗体上的结合位点,用酶标仪测量微孔溶液的吸光度值,雌酚浓度与吸光度值成反比,按绘制的校正曲线定量计算。

3.2 试剂和材料

除另有规定外,所用化学试剂均为分析纯,或为更高级别。水为重蒸馏水。

3.2.1 二苯乙烯类免疫测定试剂盒。

3.2.2 叔丁基甲基醚:色谱纯。

3.2.3 三氯甲烷

3.2.4 6 mol/L磷酸:吸取58.8 mL磷酸溶于水中,并定容于100 mL。

3.2.5 乙醇

3.2.6 β-葡糖苷酸酶(Sigma G-0876)。

3.2.7 乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。

3.2.8 乙酸钠缓冲液(0.1 mol/L, pH=5.0):称取13.6 g乙酸钠溶解于800 mL水中,用氢氧化钠溶液调节pH值至5.0±0.1,加水定容至1000 mL。

3.2.9 氢氧化钠溶液(1 mol/L):称取40 g氢氧化钠溶于1 000 mL水中。

3.2.10 甲醇

3.2.11 标准品:己烷雌酚标准品,己烯雌酚标准品纯度均≥98%。

3.2.12 雌酚标准品溶液的配制:准确称取适量的己烷雌酚和己烯雌酚标准品,用甲醇配制成1 mg/mL标准贮备溶液,于4℃~8℃条件下保存。

3.3 仪器和设备

3.3.1 酶标仪:波长450 nm。

3.3.2 37℃±2℃培养箱。

3.3.3 均质器。

3.3.4 天平。

3.3.5 离心机:3 000 r/min。

3.3.6 氮气吹干仪。

3.3.7 振荡器。

3.3.8 洗板机。

3.3.9 固相萃取仪。

3.3.10 微量加样器:20 uL,50 uL,100 uL,200 uL。

3.3.11 微量多通道加样器:200 uL。

3.3.12 免疫亲和柱:50 ng,5 mL。

3.4 试样提取和净化

3.4.1 提取

3.4.1.1 肌肉样品

称取2.5 g(精确到0.1g)试样于离心管中,加入15 mL叔丁基甲基醚,均质30 s,涡旋振荡3 min。在2000r/min下离心10 min,移取12 mL醚层液体,在40℃氮气流下蒸发至干燥。用1 mL三氯甲烷溶解干燥物,涡旋振荡3 min。加2 mL 1 mol/L氢氧化钠,涡旋振荡3 min。在2000r/min下离心10 min,移取上层液到另一试管中,保留1 mL水相。再加入1 mL 1 mol/L氢氧化钠到三氯甲烷溶液中,涡旋振荡3 min,在2 000 r/min下离心 10 min,移取上层提取液到另一试管中,保留1 mL水相。合并两次提取液,加入200uL的6 mol/L磷酸中和2 mL的氢氧化钠提取液后待净化。

3.4.1.2 肝脏样品

称取2.5g(精确到0.1g)试样至离心管中,加入3 mL乙酸钠缓冲液(0.1mol/L; pH 5.0),加入8 000单位β-葡糖苷酸酶,均质约30 s。37℃±2℃培养2h,以下按3.4.1.1提取步骤操作。

3.4.2 净化

以免疫亲和柱净化样品提取液。用柱储存缓冲液过柱,再用15 mL柱洗涤缓冲液平衡柱子(流速≤3 mL/min)。取全部中和后的样品提取液过柱(重力引流)。用5 mL柱洗涤缓冲液洗涤柱子两次(流速≤2 mL/min)。用5 mL水洗涤柱子(流速≤2mL/min)。用3 mL乙醇/水(70/30,体积比)洗脱样品中可能存在的雌激素。此步的洗脱液用干净的试管收集后用于试剂盒检测。

文章来源:《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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