7.2 测定条件

7.2.1 操作条件

所有操作应在室温下(20℃～24℃)进行，泰乐菌素试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温(20℃～24℃)后方可使用。

7.2.2 洗板条件

人工洗涤次数5次以上，每次加入洗涤液量为250 uL；自动洗板可以预定5次。

7.2.3 酶标仪测定条件

酶标仪测定波长为450 nm。

7.3 测定步骤

7.3.1 将测定需用的微孔板备齐并插入微孔架上，记录标准品及样品等在微孔架上的位置。

7.3.2 吸取50 uL泰乐菌素标准溶液(浓度分别为：0、0.3、0.6、1.25、2.5、5、10、25 ng/mL)于孔A1、A2-H1、H2；吸取50uL样品溶液于其余微孔中。

7.3.3 吸取100 uL泰乐菌素酶标记物溶液于每一个微孔。用封口膜封孔条，并持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀，室温(20℃～24℃)下避光温育10 min(温育过程中晃动/振动反应板)。

7.3.4 倒出孔中的液体，将微孔架反扣在吸水纸上反复拍打，以除去孔中过多的残液，用洗涤缓冲液洗板6次。

7.3.5 迅速加入100 uL底物溶液于每一个微孔底部，然后，持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后，室温(20℃～24℃)下避光温育10 min。

7.3.6 迅速加入100uL 反应终止液于每一个微孔，然后，持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后，将微孔架置于酶标仪中，在450 nm处测量吸光度(加入反应终止液后应在30 min内读取吸光度)。

7.4 平行试验

按以上步骤，对同一标准溶液、同一样品溶液均应进行平行试验测定。

7.5 空白试验

除不称取试样外，均按上述步骤进行。

7.6 阳性质控

每次测定均应做一个添加自配泰乐菌素标准品溶液(4.6)的监控样品。以确定实验过程的操作准确性。

8 结果计算

标准品和样品的OD平均值除以零标准(A1、A2)的平均OD值，再乘以100，计算出各标准液和样品的百分比吸光度值。零标准为100％(最大吸光度值)，其他OD值为最大吸光度值的百分数。

以吸光度的百分比值(B/B₀)为纵坐标(％)，泰乐菌素标准溶液浓度(ng/mL)的对数值为横坐标，绘制标准工作曲线。从标准工作曲线上得到试样中相应的泰乐菌素浓度后，结果按式(1)进行计算：

式中：

X—样品中泰乐菌素的残留量，单位为微克每千克(ug/kg);

c—从标准工作曲线上得到的样品中泰乐菌素浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；

V—样品溶液的最终定容体积，单位为毫升(mL) ;

m—样品溶液所代表的最终试样质量，单位为克(g)。

也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算。所得结果表示至一位小数。

9 确证试验

如被测样品中泰乐菌素残留量的值大于限量要求时，应用其他方法进行确证。

10 本方法测定低限和回收率

10.1 检测低限

本方法的检测低限为10 ug/kg。

10.2 回收率

本方法泰乐菌素添加浓度和回收率实验数据：

—添加量为10 ug/kg时，回收率为73%～97%;

—添加量为100 ug/kg时，回收率为82.7%～113.7%;

—添加量为500 ug/kg时，回收率为87.4%～112.8%。

相关链接：进出口蜂王浆中泰乐菌素残留量测定方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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