北京普天同创生物科技有限公司
7 测定步骤
7.1 提取
称取5g均匀试样(精确到0.01g)置于50 mL具螺旋盖聚丙烯离心管中,加入0.1mL的0.05 ug/mL D6-氯丙嗪内标溶液,再加入20 mL乙腈,在均质器中均质2 min,再在超声波发生器中超声2 min。于4000 r/min离心8 min,将上层乙腈提取液过滤于25 mL棕色容量瓶中,加乙腈定容。精确移取5 mL乙腈提取液,加入20 mL 20%氯化钠水溶液,混匀。用0.01 mol/L硫酸调节pH为4.8~5.0,待净化。
7.2 净化
将OASIS HLB净化柱安装到固相萃取装置上,用5 mL甲醇和5 mL水活化,装上30 mL储液斗,将上述提取液转移至OASIS HLB净化柱中,控制流速约为1 mL/min,待提取液全部通过后,保持较强压力抽气2 min。用15 mL酸性乙腈洗脱,收集洗脱液。将洗脱液在40℃的水浴中用氮气吹至0.5 mL加入0.5 mL水,涡旋10 s,过0.45 um滤膜,供LC-MS/MS测定。此样液应在48 h内测定完毕。
7.3 测定
7.3.1 液相色谱条件
a)色谱柱:Supelco Discovery-C18,柱长150,内径2.1 mm,粒度5 um,或相当者;
b)流动相:A:乙腈+0.1%甲酸,B:水+2 mmol/L 乙酸铵+0.1%甲酸;
c)流速:200 uL/min;
d)流动相梯度洗脱程序:见表1;
e)进样量:20uL。
表1 梯度洗脱程序
7.3.2 质谱条件
a)离子源:电喷雾离子源(ESI);
b)扫描方式:正离子扫描;
c)检测方式:多反应监测(MRM);
7.3.3 高效液相色谱-质谱/质谱测定
根据试样中被测物的含量情况,选取响应值相近的标准工作液一起进行色谱分析。标准工作液和待测液中被测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。对标准工作液和样液等体积参插进样进行测定。
7.3.4定性测定
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液,如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品一致,定性离子对的相对丰度,是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示,应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致,相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围,则可判断样品中存在对应的被测物。
表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
7.4 空白试验
除不加试样外,均按上述操作步骤进行。
8 定量结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中镇静剂的含量。计算结果需扣除空白值。
式中:
X—样品中目标化合物残留量,单位为微克每千克(ug/kg) ;
c—标准工作溶液中待测组分的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL) ;
ci—样液中内标物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
A—样液中待测组分的峰面积;
Asi—标准工作溶液中内标物的峰面积;
V—样品溶液最终定容体积,单位为毫升(mL) ;
csi—标准工作溶液中内标物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
Ai—样液中内标物的峰面积;
As—标准工作溶液中药物的峰面积;
m—最终样液代表的试样质量,单位为克(g)。
9 测定低限、回收率
9.1 测定低限(LOQ)
肉和肾中氯丙嗪和地西洋的测定低限均为1.0 ug/kg。
9.2 回收率
9.2.1 肾中回收率的实验数据见表3。
表3 肾中回收率的实验数据
9.2.2 肉中回收率的实验数据见表4。
表4 肉中回收率的实验数据
相关链接:进出口动物源性食品中镇静剂类药物残留量的检测方法(一)
文章来源:《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》
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