1 范围

本标准规定了动物源食品中氢化泼尼松残留量的检测方法。

本标准适用于动物源食品中氢化泼尼松残留量的检测。

2 测定方法

2.1 方法提要

样品用乙腈提取，经C₁₈固相萃取柱净化，净化后的氢化泼尼松在酸性条件下用K₂Cr₂O₇快速氧化衍生，气相色谱-二级质谱法(GC-MS2)检测，外标法定量。

2.2 试剂与材料

2.2.1 甲醇(色谱纯)。

2.2.2 乙腈(色谱纯)。

2.2.3 丙酮(色谱纯)。

2.2.4 正己烷(色谱纯)。

2.2.5 二氯甲烷(色谱纯)。

2.2.6 乙酸乙酯(色谱纯)。

2.2.7 乙醇(色谱纯)。

2.2.8 氢化泼尼松标准品(prednisolone, CAS#:50-24-8，分子式C₂₁H₂₈O₅)：纯度≥99％。

2.2.9 氢化泼尼松标准储备溶液：10 mg/L无水甲醇。

2.2.10 乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH4.6，在158 mL 乙酸钠溶液中加入42 mL乙酸)。

2.2.11 酸性K₂Cr₂O₇溶液(取18 mL水，加入2 mL浓硫酸，再加1.0g K₂Cr₂O₇)。

2.2.12 酶解汁(含件葡萄糖醛苷酶和磺酯酶，大于≥10000000u/g)。

2.2.13 C₁₈固相萃取柱(3 mL, 500 mg)。

2.2.14 碳酸氢钠溶液(10%)。

2.3 仪器和设备

2.3.1 气相色谱-离子质谱(EI源)。

2.3.2 氮吹仪。

2.3.3 高速离心机。

2.3.4 振荡器。

2.3.5 涡旋振荡器。

2.3.6 固相萃取装置。

2.3.7 超声清洗器。

2.4 测定步骤

2.4.1 提取

称取10.00g组织样品(猪肉、猪肝和猪肾)于组织捣碎器中粉碎成浆状，置于50 mL离心管内，加入15 mL pH4.6的乙酸-乙酸钠缓冲溶液，再加入200 uL酶解汁，振荡10 min、超声15 min后于60℃水浴中加热2h。冷却后加入20 mL乙腈并振荡30 min，以7500r/min离心分离20 min，将上层乙腈转移至另一离心管内，加入8 mL正己烷、2 mL 二氯甲烷后振荡，再以4500r/min离心5 min，然后移取中间层至比色管内并在50℃条件下氮气吹干。将吹干后的残渣用1 mL 乙醇涡旋溶解，再加入9 mL水混匀，备过C18柱。

2.4.2 净化

C₁₈小柱分别用5 mL甲醇和5 mL水活化，5 mL乙醇-水(体积比1:9)平衡，加入上述乙醇上样溶液后，依次用5mL水、5mL丙酮-水(体积比1:9)、3 mL甲醇-水(体积比4：6)淋洗并抽干，再用5 mL正己烷淋洗，最后用2 mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液并用氮气吹干。

2.4.3 衍生化

将上述残渣用100 uL乙腈复溶，加100 uL酸性K₂Cr₂O₇氧化液并混匀，于60℃水浴中加热18 min，冷却后依次加入200 uL 10％碳酸钠溶液、1 mL去离子水、3 mL二氯甲烷，超声提取10 min后于4500 r/min离心5 min。将下层有机相转移、氮气吹干，加乙酸乙酯定容至1mL，用于GC-MS/MS测定。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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