1 范围

本标准规定了进出口动物组织中硫粘菌素残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。

本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾中硫粘菌素残留量的检测和确证。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。(GB /T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 方法提要

试样经乙酸乙酯提取，正己烷脱脂，固相萃取小柱净化后，液相色谱-质谱/质谱法测定和确证，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/ T 6682规定的一级水。

4.1 乙酸乙酯：色谱纯。

4.2 正己烷：色谱纯。

4.3 甲醇：色谱纯。

4.4 乙腈：色谱纯。

4.5 乙酸铵。

4.6 0.1％乙酸铵：称取1.0g乙酸铵，加水溶解并定容至1000mL。

4.7 硫粘菌素标准物质(Tiamulin)：C₂₈H₄₇NO₄S, CAS No.55297-95-5，纯度大于等于98.8％。

4.8 硫粘菌素标准储备溶液(1.0 mg/mL)：称取适量的硫粘菌素标准物质(4.7)，用甲醇配成1.0 mg/mL的标准储备液。储备液置于-18℃避光贮存。

4.9 硫粘菌素标准工作溶液(1.0 ug/mL)：吸取适量的硫粘菌素标准储备溶液(4.8)，用甲醇配成1.0 ug/mL的标准工作溶液。标准工作溶液置于4℃避光贮存。

4.10 固相萃取小柱：Waters oasis HLB柱，500 mg, 6 mL，或相当者。

4.11 微孔滤膜:0.45 um，有机相。

5 仪器和设备

5.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2 分析天平：感量分别为0.1mg和0.01g。

5.3 绞肉机。

5.4 涡旋混合器：2000r/min。

5.5 离心机：3 000 r/min。

5.6 旋转蒸发器。

5.7 固相萃取装置。

5.8 具塞离心管：聚四氟乙烯，15 mL，和50 mL。

6 试样制备与保存

从所取动物肌肉、肝脏、肾脏全部样品组织中取出有代表性样品约0.5kg，用绞肉机充分绞碎混匀均分成两份。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并标明标记，于-18℃以下冷冻存放。

试样制备与保存过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

7 测定步骤

7.1 提取

称取5g试样(精确到0.01g)于50 mL离心管(5.8)中，加入25 mL乙酸乙酯(4.1),2000r/min涡旋混匀2 min,3000r/min离心5 min，收集提取液至浓缩瓶中。残渣再加入20 mL乙酸乙酯，重复上述抽提操作。合并提取液，50℃以下旋转浓缩至近干。用4 mL正己烷(4.2)和4mL水依次将残渣转移至15 mL离心管(5.8)中，2000r/min涡旋混匀1 min, 3000r/min离心3 min，弃去上层正己烷溶液，再加入4 mL正己烷，重复上述脱脂操作，所得水层提取液待净化。

7.2 净化

分别用甲醇(4.3)和水各3 mL对Oasis HLB固相萃取小柱(4.10)进行活化预处理，然后将测定步骤7.1所得水层提取液转移至小柱上，控制流出速度小于2 mL/min。用10 mL水分次洗涤离心管，洗涤液淋洗Oasis HLB小柱后弃去。用6 mL甲醇洗脱，收集全部洗脱液，加水定容至10 mL，混匀后过0.45 um滤膜(4.11)，供液相色谱-串联质谱测定。

7.3 硫粘菌素基质校准标准溶液的配制

称取七个基质空白样品(称样量为5g)于50 mL离心管(5.8)中，其中六个空白样品中分别加入适量硫粘菌素标准工作溶液(4.9)，按照样品操作步骤7.1、7.2同步操作，使最终样品溶液中硫粘菌素的浓度分别为2.5ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL。所得系列硫粘菌素基质标准校准溶液即配即用，用以制作标准曲线。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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