1 范围

本标准规定了进出口动物源性食品中乌洛托品残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。

本标准适用于进出口鸡肉、鸡肝脏、鸡肾脏和猪肉中乌洛托品残留量的检测和确证。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方面研究使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法(GB/T 6682-2008, ISO 3696:1987, MOD)

3 方法提要

用乙腈提取试样中的乌洛托品残留，正己烷除去脂溶性杂质，阳离子交换固相萃取柱净化，洗脱液浓缩后残渣用碱性乙腈定溶，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。

4 试剂和材料

所有试剂除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 乙腈：色谱纯。

4.2 正己烷：色谱纯。

4.3 甲醇：色谱纯。

4.4 乙酸(99％)。

4.5 氨水(25％)。

4.6 盐酸(36%)。

4.7 乙酸铵。

4.8 0.1％乙酸溶液：量取0.5 mL乙酸(4.4)，用水稀释至500 mL。

4.9 0.1 mot/ L盐酸溶液：量取4.2mL盐酸(4.6)，用水稀释至500 mL。

4.10 20 mmol/L 乙酸铵缓冲液(pH=4)：准确称取0.77 g乙酸铵溶于500 mL水中，用乙酸溶液(4.8)调pH值至4。

4.11 5％氨水一甲醇(5+95，体积比)溶液：量取5 mL氨水(4.5)，用甲醇稀释至100 mL。

4. 12 0.1％乙酸-乙腈(2十8，体积比)溶液：量取200 mL乙酸溶液(4.8)，用乙腈稀释至1 000 mL。

4.13 乙腈饱和的正己烷溶液：20 mL乙腈中加入100 mL正己烷，充分振荡后，静置分层，取上层正己烷层备用。

4.14 无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，冷却后在干燥器中储存备用。

4.15 乌洛托品标准物质(Urotropine，分子式：C₆H₁₂N₄)：纯度大于99.9％。

4.16 标准储备溶液：准确称取按其纯度折算为100％质量的乌洛托品标准品0.010g，用乙腈溶解并定容至100 mL，浓度相当于100 ug/mL。储备液在。0℃～4℃冰箱避光保存，可使用6个月。

4.17 标准中间溶液：准确量取标准储备溶液(4.16)1.0 mL，用乙酸-乙腈溶液(4.12)溶解并定容至100 mL，浓度相当于1.0 ug/mL，在0℃～4℃冰箱避光保存，使用前配制。

4.18 标准工作溶液：根据需要用1.0 mL适当浓度的标准工作溶液溶解空白样品浓缩残渣，配制成适当浓度的标准工作溶液，使用前配制。

4.19 固相萃取柱(OasisMCX) : 60 mg, 3 mL，或相当者。OasisMCX固相萃取柱使用前分别用3 mL甲醇、3 mL水、3 mL乙酸铵溶液预处理，并保持柱体湿润。

4.20 微孔滤膜：0.22um，有机相。

5 仪器和设备

5.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源(EST)或相当者。

5.2 分析天平：感量为0.1mg，0.01g。

5.3 固相萃取装置。

5.4 pH计：测量精度±0.02。

5.5 旋转蒸发器。

5.6 氮吹仪。

5.7 旋涡混匀器。

5.8 组织捣碎机。

5.9 均质器(10000r/min)。

5.10 离心机(4000 r/min)。

5.11 50mL玻璃离心管。

6 试样的制备与保存

取样品中有代表性的约200g，用组织捣碎机捣碎，混匀，均分成两份作为试样，分别装入洁净容器，密封并做好标识，于-18℃冰箱内保存。

在抽样和制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

7 测定步骤

7.1 提取

准确称取5g试样(精确到0.01g)于50 mL离心管中，加入2g无水硫酸钠、20 mL乙腈，用均质器以10000r/min均质1 min，以4000r/min离心5 min，上清液转移至50 mL具塞离心管中，样品再用10 mL乙腈重复上述提取、离心操作，合并两次提取的上清液，加入经乙腈饱和的正己烷溶液(4.13)10 mL，用漩涡振荡器混匀2 min后，以4000 r/min离心3 min，弃去上清液，乙腈相过无水硫酸钠，转移至浓缩瓶，浓缩近干后待净化。

7.2 净化

用1.0 mL 20 mmol/L乙酸铵缓冲液(4.10)溶解浓缩瓶中残渣，以1 mL/min～2 mL/min的速度过固相萃取柱(4.19)，再用2.0 mL 20 mmol/L乙酸铵溶液分两次洗涤浓缩瓶，过固相萃取柱，用1.0mL水、1.0 mL甲醇依次淋洗固相萃取柱，弃去流出液，在15 mmHg以下减压抽1 min使柱体干涸；用3.0 mL 5％氨水-甲醇溶液(4.11)洗脱，洗脱液在45℃下用氮吹仪浓缩至近干，用1.0 mL 0.1％乙酸-乙腈溶液(4.12)溶解残渣，经0.22 um滤膜过滤，供液相色谱-质谱/质谱测定。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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