4.4 检测步骤

4.4.1 对照液的配制

4.4.1.1 阴性对照液的配制

称取试剂盒中阴性对照奶粉(4.2.1.1)约13g，加40℃ 100 mL温水溶解，配制成阴性对照溶液，摇至没块状颗粒，冷却至0℃～4℃备用。此溶液可在0℃～4℃保存72 h，如长时间不用，可于-15℃以下的冰箱中保存2个月，使用时将其置于室温下解冻，冷却至0℃～4℃备用，解冻后的溶液在0℃～4℃可保存24 h。

4.4.1.2 阳性对照液的配制

取适量磺胺二甲基嘧啶或多种抗生素混合标准品(含磺胺二甲基嘧啶)(4.2.1.2)，用阴性对照液(4.4.1.1)配制成阳性对照溶液，含磺胺二甲基嘧啶浓度为10 ug/kg。溶液的保存方法同4.4.1.1。

4.4.2 样品前处理

4.4.2.1 鲜奶

取20.0g鲜奶于50 mL离心管，以4000r/min离心5 min，除去上层脂肪层，以1.0 mol/L盐酸溶液或1.0 mol/L氢氧化钠调节pH至6.5～7.0。冷却至0℃～4℃待测。

4.4.2.2 奶粉

称取2g(精确到0.01g)奶粉于50 mL离心管，加水15.0 mL溶解。以4000r/min离心5 min，除去上层脂肪层，以1.0 mol/L盐酸溶液或1.0 mol/L氢氧化钠调节pH至6.5～7.0。冷却至0℃～4℃待测。

4.4.3 检测

4.4.3.1 将一受体试剂片剂(4.2.1.3)加入到硅硼酸盐玻璃试管中，加入300 uL水，置于涡旋混合器上振荡10s将药片溶解。

4.4.3.2 加入5.00 mL样品液(4.4.2.1或4.4.2.2)或阴性对照液或阳性对照液(4.4.1.2)，分别用于测试样品、阴性对照和阳性对照。

4.4.3.3 将一[³H]标记的磺胺二甲基嘧啶药物片剂(4.2.1.4)加入试管，涡动混合15s，置85℃±2℃加热3 min。

4.4.3.4 取出试管，3300r/min离心3 min，立即倾去上清液，用棉签擦拭去试管口处的脂肪环和壁上水渍。

4.4.3.5 加300 uL水置于涡旋混合器上振荡10 s，将试管中的沉淀物重新溶解，加3 mL闪烁液(4.2.7)至试管中，加盖、置于涡旋混合器上振荡混匀。

4.4.3.6 将试管放入液体闪烁计数仪内，在[³H]频道进行60 s LSC计数cpm。

5 结果判定

5.1 控制点的确定

5.1.1 控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值，可根据筛选水平自行设定。

5.1.2 鲜奶筛选水平为10 ug/kg，控制点设定步骤：取20.0 g空白鲜奶样品，加入200uL磺胺二甲基嘧啶标准溶液(4.2.4)，按4.4.2前处理和4.4.3进行测定，取六个非重复的加标样本的计数值，求出平均值乘以系数1.24，即为筛选水平10 ug/kg的控制点。

5.1.3 奶粉筛选水平为20 ug/kg，控制点设定步骤：取2g(精确到0.01g)空白奶粉样品，加入40.0uL磺胺二甲基嘧啶标准溶液(4.2.4)，按4.4.2前处理和4.4.3进行测定，取六个非重复的加标样本的计数值，求出平均值乘以系数1.24，即为筛选水平20 ug/kg的控制点。

5.2 结果判定

5.2.1 当样品的cpm值大于控制点时，判定为“阴性”。即样本中磺胺类含量低于筛选水平。

5.2.2 当样品的cpm值等于或小于控制点，视为“初筛怀疑阳性”，此时应重新测定样品、阴性对照液和阳性对照液的cpm值。当阴性对照液和阳性对照液的cpm值在正常范围波动，样本测试结果cpm值大于控制点，判定为“阴性”；若样本cpm值仍等于或小于控制点，则判定样品为“筛选阳性”。

6 确证实验

本标准作为筛选方法，阳性结果需用其他方法进行确证。

7 测定低限

本方法测定低限以磺胺二甲嘧啶计磺胺类药物总量，鲜奶：10 ug/kg，奶粉为：20 ug/kg。

相关链接：进出口乳及乳制品中磺胺类药物残留检测方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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