进出口乳及乳制品中磺胺类药物残留检测方法(二)
来源/作者:中国标准物质网  日期:2019-06-12

4.4 检测步骤

4.4.1 对照液的配制

4.4.1.1 阴性对照液的配制

称取试剂盒中阴性对照奶粉(4.2.1.1)约13g,加40℃ 100 mL温水溶解,配制成阴性对照溶液,摇至没块状颗粒,冷却至0℃~4℃备用。此溶液可在0℃~4℃保存72 h,如长时间不用,可于-15℃以下的冰箱中保存2个月,使用时将其置于室温下解冻,冷却至0℃~4℃备用,解冻后的溶液在0℃~4℃可保存24 h。

4.4.1.2 阳性对照液的配制

取适量磺胺二甲基嘧啶或多种抗生素混合标准品(含磺胺二甲基嘧啶)(4.2.1.2),用阴性对照液(4.4.1.1)配制成阳性对照溶液,含磺胺二甲基嘧啶浓度为10 ug/kg。溶液的保存方法同4.4.1.1。

4.4.2 样品前处理

4.4.2.1 鲜奶

取20.0g鲜奶于50 mL离心管,以4000r/min离心5 min,除去上层脂肪层,以1.0 mol/L盐酸溶液或1.0 mol/L氢氧化钠调节pH至6.5~7.0。冷却至0℃~4℃待测。

4.4.2.2 奶粉

称取2g(精确到0.01g)奶粉于50 mL离心管,加水15.0 mL溶解。以4000r/min离心5 min,除去上层脂肪层,以1.0 mol/L盐酸溶液或1.0 mol/L氢氧化钠调节pH至6.5~7.0。冷却至0℃~4℃待测。

4.4.3 检测

4.4.3.1 将一受体试剂片剂(4.2.1.3)加入到硅硼酸盐玻璃试管中,加入300 uL水,置于涡旋混合器上振荡10s将药片溶解。

4.4.3.2 加入5.00 mL样品液(4.4.2.1或4.4.2.2)或阴性对照液或阳性对照液(4.4.1.2),分别用于测试样品、阴性对照和阳性对照。

4.4.3.3 将一[3H]标记的磺胺二甲基嘧啶药物片剂(4.2.1.4)加入试管,涡动混合15s,置85℃±2℃加热3 min。

4.4.3.4 取出试管,3300r/min离心3 min,立即倾去上清液,用棉签擦拭去试管口处的脂肪环和壁上水渍。

4.4.3.5 加300 uL水置于涡旋混合器上振荡10 s,将试管中的沉淀物重新溶解,加3 mL闪烁液(4.2.7)至试管中,加盖、置于涡旋混合器上振荡混匀。

4.4.3.6 将试管放入液体闪烁计数仪内,在[3H]频道进行60 s LSC计数cpm。

5 结果判定

5.1 控制点的确定

5.1.1 控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值,可根据筛选水平自行设定。

5.1.2 鲜奶筛选水平为10 ug/kg,控制点设定步骤:取20.0 g空白鲜奶样品,加入200uL磺胺二甲基嘧啶标准溶液(4.2.4),按4.4.2前处理和4.4.3进行测定,取六个非重复的加标样本的计数值,求出平均值乘以系数1.24,即为筛选水平10 ug/kg的控制点。

5.1.3 奶粉筛选水平为20 ug/kg,控制点设定步骤:取2g(精确到0.01g)空白奶粉样品,加入40.0uL磺胺二甲基嘧啶标准溶液(4.2.4),按4.4.2前处理和4.4.3进行测定,取六个非重复的加标样本的计数值,求出平均值乘以系数1.24,即为筛选水平20 ug/kg的控制点。

5.2 结果判定

5.2.1 当样品的cpm值大于控制点时,判定为“阴性”。即样本中磺胺类含量低于筛选水平。

5.2.2 当样品的cpm值等于或小于控制点,视为“初筛怀疑阳性”,此时应重新测定样品、阴性对照液和阳性对照液的cpm值。当阴性对照液和阳性对照液的cpm值在正常范围波动,样本测试结果cpm值大于控制点,判定为“阴性”;若样本cpm值仍等于或小于控制点,则判定样品为“筛选阳性”。

6 确证实验

本标准作为筛选方法,阳性结果需用其他方法进行确证。

7 测定低限

本方法测定低限以磺胺二甲嘧啶计磺胺类药物总量,鲜奶:10 ug/kg,奶粉为:20 ug/kg。

相关链接:进出口乳及乳制品中磺胺类药物残留检测方法(一)

文章来源:《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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【关键词】磺胺二甲基嘧啶 氢氧化钠 中国标准物质