进出口动物源性食品中氨基糖苷类药物残留测定方法(二)
来源/作者:中国标准物质网  日期:2019-06-12

7 检测步骤

7.1 庆大霉素-新霉素族残留测定(用于庆大霉素新霉素卡那霉素安普霉素巴龙霉素的测定)

7.1.1 阴性和阳性对照液的配制

7.1.1.1 阴性对照液的配制:取2.0 mL Ag萃取缓冲液加入6.0mL 水稀释:混匀后取出4.0mL作为阴性对照液,使用前配制。

7.1.1.2 阳性对照液的配制:取0.3 mL MSU多抗生素标准溶液加至6.0 mL Ag萃取缓冲液中,混匀后取出2.0 mL,用6.0 mL水稀释,取出4.0 mL作为阳性对照液,使用前配制。

7.1.2 提取

称取20.0g样品于50 mL具塞离心管中,加入20 mL Ag萃取缓冲液,均质1 min,涡旋混匀3 min,于80℃恒温加热器中温育30 min,取出后放置冰水浴中冷却10 min,于3300r/min离心10 min,转移全部上清液于另一50 mL离心管中,用0.1mol/L氢氧化钠溶液(5.5)或0.1 mol/L盐酸溶液(5.6)调节pH值6.0,此样液待测定。

7.1.3 检测步骤

7.1.3.1 用药片压杆的平端,将白色受体试剂药片压入8 mL离心管中,加入0.3 mL水,涡旋混匀10s。

7.1.3.2 向离心管中加入4.0 mL样品提取液(7.1.2),压入黄色庆大霉素氖标记物药片,涡旋混匀15 s,35℃±1℃温育5 min。

7.1.3.3 温育后取出于3300r/min离心5 min,立即倾去全部上清液,将试管内的脂肪环和壁上残留水溶液用棉签擦试干净。

7.1.3.4 加入0.3mL水,涡旋混匀10s,将试管中的沉淀物溶解。加入3 mL闪烁液(5.7),加盖,涡旋混匀后放入Charm Ⅱ 7600分析仪内,[3H]频道计数60 s,测定cpm值。

7.2 链霉素族残留测定(用于链霉素双氢链霉素的测定)

7.2.1 阴性和阳性对照液的配制

7.2.1.1 阴性对照液的配制:取6.0 mL MSU萃取缓冲液与2.0 mL阴性浓缩液混匀,取出2.0 mL作为阴性对照液,使用前配制。

7.2.1.2 阳性对照液的配制:取0.30 mL MSU多抗生素标准品溶液,加至6.0 mL、阴性浓缩液中,混匀后取出2.0 mL,用6.0 mL MSU萃取缓冲液稀释,取出2.0 mL作为阳性对照液,使用前配制。

7.2.2 提取

称取10.0g样品于50 mL具塞离心管中,加入30 mL MSU萃取缓冲液,均质1 min,涡旋混匀3 min,于80℃恒温加热器中温育30 min,取出后放置冰水浴中冷却10 min,于3300r/min离心10 min,转移全部上清液于另一50 mL离心管中,用M2缓冲液调节pH值7.5,此样液待测定。

7.2.3 检测步骤

7.2.3.1 用药片压杆的平端,将白色受体试剂药片压入8 mL离心管中,加入0.3 mL水,涡旋混匀10s。

7.2.3.2 向离心管中加入2.0 mL样品提取液(7.2.2) ,涡旋混匀10 s,35℃±1℃温育2 min。

7.2.3.3 取出后将绿色链霉素氘标记物药片压入离心管,涡旋混匀10 s,35℃±1℃温育2 min。

7.2.3.4 温青后取出于3 300 r/min离心5 min,立即倾去全部上清液,将试管内的脂肪环和壁上残留水溶液用棉签擦试干净。

7.2.3.5 加入0.3 mL水,涡旋混匀10 s,将试管中的沉淀物溶解。加入3 mL闪烁液(5.7),加盖,涡旋混匀后放入Charm U 7600分析仪内,[3H]频道计数60 s,测定cpm值。

8 结果判定

8.1 控制点的确定

8.1.1 庆大霉素-新霉素族残留控制点的确定

称取20.0g同类空白样品,添加0.2 mL MSU多抗生素标准品溶液,充分混匀,按7.1.2和7.1.3进行提取与测定,测定6个非重复加标样品的cpm计数值,取结果平均值,该平均值乘以系数1.3即为控制点。

8.1.2 链霉素族残留控制点的确定

称取10.0g同类空白样品,添加0.5 mL MSU多抗生素标准品溶液,充分混匀,按7.2.2和7.2.3进行提取与测定,测定6个非重复加标样品的cpm计数值,取结果平均值,该平均值乘以系数1.3即为控制点。

8.2 结果判定

样品的cpm计数值大于控制点时,则判断为阴性;样品的cpm计数值小于或等于控制点时,应重新测定样品;对于庆大霉素-新霉素族需重新测定阴性对照液(7.1.1.1)和阳性对照液(7.1.1.2);对于链霉素族需重新测定阴性对照液(7.2.1.1)和阳性对照液(7.2.1.2),其cpm计数值应在正常范围内波动。当重新测定样品的计数值大于控制点时,判定为“阴性”;小于或等于控制点时,则判定为“初筛阳性”。

9 确证试验

本标准为筛选方法,对于阳性样品,需用其他方法进行确证。

10 方法检出限

链霉素方法检出限为500 ug/kg;双氢链霉素方法检出限为500 ug/kg;庆大霉素方法检出限为50 ug/kg;新霉素方法检出限为30 ug/kg;卡那霉素方法检出限为100 ug/kg;安普霉素方法检出限为300 ug/kg;巴龙霉素方法检出限为300 ug/kg。

文章来源:《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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【关键词】庆大霉素 新霉素 卡那霉素 安普霉素 巴龙霉素