6 测定步骤

6.1 提取

6.1.1 肌肉、内脏和鱼等试样

准确称取2g均匀试样(精确到0.01g)于干净50 mL塑料离心管中，加入5g无水硫酸钠(3.9),混匀后加入10 mL三乙胺-乙腈混合提取液(3.15)，用均质器10000r/min均质2 min, 5000r/min离心3 min，将有机相转移至25 mL容量瓶中，残渣再用10 mL提取液(3.15)均质提取。离心合并有机相，用提取液(3.15)定容至25 mL，混匀后待净化。

6.1.2 牛奶、蜂蜜、王浆等试样

准确称取2g均匀试样(精确至0.01g)于干净50 mL塑料离心管中，牛奶和蜂蜜加入10 mL 10%。三氯乙酸＋乙腈混合提取液(3.16)，蜂王浆加入10 mL 10％三氯乙酸提取液(3.14)，涡旋振荡2 min,超声20 min, 5000 r/min离心3 min，过滤纸后待净化。

6.2 净化

6.2.1 肌肉、内脏和鱼等试样

移取待净化溶液(6.1.1)2.00 mL，于35℃下浓缩至干。加入1.00 mL 80％乙腈-水溶液(3.13)溶解残渣，加入2 mL正己烷旋涡混匀2 min后，5000r/min离心3 min，将下层过0.22 um滤膜后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

6.2.2 牛奶、蜂蜜和王浆试样

将待净化溶液(6.1.2)移入固相萃取柱(3.2.3),3mL水和3 mL甲醇淋洗，3 mL 5％氨水-甲醇(3.12)洗脱，于35℃下浓缩至干。加入1.00 mL乙腈-水溶液(3.13)溶解残渣，过0.22um滤膜后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

6.3 测定

6.3.1 液相色谱-串联质谱条件

a)色谱柱：Acquity UPLCTM BEH C₁₈柱，2.1 mm(内径)×100 mm, 1.7um，或相当者；

b)柱温：40℃；

c)流动相：甲醇-0.2％甲酸;

d)流速：0.20 mL/min;

e)进样量：5 uL;

f)离子源：电喷雾离子源；

g)扫描方式：正离子；

h)检测方式：多反应监测(MRM) ;

i)串联质谱参考条件均优化至最佳灵敏度。

6.3.2 定性、定量

按照6.3.1液相色谱-串联质谱条件测定样液和标准工作溶液，外标标准曲线法测定样液中的磺胺增效剂残留量。样品中待测物残留量应在标准曲线范围之内，如果残留量超出标准曲线范围，应用空白样品提取液进行适当稀释。在上述色谱条件下，二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶、二甲氧甲基苄氨嘧啶的质量色谱峰保留时间约为1.99 min, 2.23 min, 2.54 min。在相同实验条件下，样品与标准工作液中待测物质的色谱峰保留时间偏差在±2.5％以内，并且在扣除背景后的样品质量色谱图中，所选择的离子对均出现，同时与标准品的相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。

表1 液相色谱-串联质谱定性时相对离子丰度最大允许偏差

6.3.3 空白试验

空白样品，按上述测定步骤进行。

7 结果计算和表述

用数据处理软件中的外标法，或绘制标准曲线，按式(1)计算样品中磺胺增效剂残留量。

式中：

X_i—试样中磺胺增效剂的残留量，单位为微克每千克(ug/kg) ;

c_i—由标准曲线得到的样液中磺胺增效剂的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

c_i,o—由标准曲线而得的空白实验中的磺胺增效剂的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);

V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL);

m—最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)。

相关链接：进出口动物源性食品中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶残留量的检测方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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