1 范围

本标准规定了动物源食品中7种雄性激素类药物残留量测定的制样、液相色谱-质谱/质谱测定和确证方法。

本标准适用于蜂蜜、牛奶、猪肾、猪肝和猪肉中去甲雄三烯醇酮、去氢睾酮、19-去甲睾酮、睾酮、脱氢表雄酮、雄烯二酮和表皋酮等七种雄性激素类药物残留量的测定。

2 规范性引用文件

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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 方法提要

试样经酶解，乙腈提取样品中七种雄性激素类药物残留，固相萃取柱净化，浓缩，液相色谱-质谱/质谱测定，内标法定量。

4 试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯；水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 乙腈，色谱级。

4.2 正己烷，色谱级。

4.3 丙酮，色谱级。

4.4 甲醇，色谱级。

4.5 正丙醇，色谱级。

4.6 β-葡糖苷硫酸酯酶(葡萄糖苷酶;117 800 unit/mL；硫酸酯酶,1008 unit/mL)。

4.7 硅藻土。

4.8 丙酮-水溶液(20+80，体积比)：取丙酮(4.3) 20 mL，水80 mL，混合后振摇混匀。

4.9 乙腈饱和的正己烷溶液：取正己烷(4.2) 200 mL于250 mL分液漏斗中，加入少量乙腈(4.1)，剧烈振摇数分钟，静止分层后弃下层乙腈层即得。

4.10 乙腈-水溶液(10+90，体积比)：取乙腈(4.1)10 mL，水90 mL，混合后振荡混匀。

4.11 固相萃取柱：C₁₈柱，500 mg, 6 mL或相当者，使用前用5 mL甲醇,5 mL水活化。

4.12 固相萃取柱：NH₂柱，500 mg, 6 mL或相当者，使用前用5 mL乙腈活化。

4.13 标准物质和内标：去甲雄三烯醇酮、去氢睾酮,19-去甲睾酮、睾酮、脱氢表雄酮、雄烯二酮、表睾酮等标准物质，纯度≥98%;睾酮-D2和脱氢表雄酮-D2内标物质：纯度≥97％。

4.14 标准溶液：

4.14.1 标准储备溶液：分别准确称取适量七种雄性激素相应化合物标准物质(4.13)，用甲醇溶解定容至50 mL，得质量浓度分别为1 000 ug/mL的标准储备溶液。在-18℃以下，有效期12个月。

4.14.2 混合标准中间液：准确吸取各种雄性激素类标准储备液(4.14.1)适量，用甲醇准确稀释到去甲雄三烯醇酮、去氢睾酮,19-去甲睾酮、睾酮、雄烯二酮、表睾酮的浓度为10 ug/mL，脱氢表雄酮的浓度为50 ug/mL，在-18℃以下，有效期9个月。

4.14.3 氘代内标储备溶液：分别准确称取适量睾酮-D2和脱氢表雄酮-D2标准物质(4.13)，用甲醇溶解定容至50 mL，得质量浓度分别为1 000 ug/mL的氘代内标储备溶液，在-18℃以下，有效期12个月。

4.14.4 混合氘代内标中间溶液：准确吸取2种氘代内标储备液(4.14.3)适量，用甲醇准确稀释到睾酮-D2的浓度为10 ug/mL，脱氢表雄酮-D2的浓度为50 ug/mL，在-18℃以下，有效期9个月。

4.14.5 混合标准工作液：标准工作液根据需要使用前用空白样品基质提取溶液配制，空白样品基质溶液采用相应的无残留基质样品参照7.1.1,7.1.2,7.2所述操作步骤操作。该溶液使用前配制。

4.14.6 混合氘代内标工作溶液：分别准确吸取混合氘代内标中间液(4.14.4)适量，用甲醇准确稀释到睾酮-D2的浓度为20 ug/L，脱氢表雄酮-D2的浓度为500 ug/L作为氘代内标工作溶液。该溶液使用前配制。

4.15 微孔滤膜：0.22 um。

5 仪器和设备

5.1 液相色谱-质谱/质谱仪或相当者：配有电喷雾离子源。

5.2 固相萃取装置。

5.3 旋涡混合器。

5.4 高速冷冻离心机：10 000 r/min。

5.5 螺旋盖聚丙烯离心试管，50 mL。

5.6 组织捣碎机。

5.7 均质器。

5.8 超声波仪。

5.9 吹氮浓缩仪。

5.10 恒温水浴振荡器。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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