6 试样制备与保存

6.1猪肉、猪肝和猪肾

取猪肉、猪肝和猪肾的可食部分约500 g代表性样品，用组织捣碎机充分捣碎，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记。

6.2 牛奶

取约500 g样品，充分均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记。

6.3样品保存

猪肉、猪肝和猪肾试样于-18℃下冷冻避光存放；牛奶试样于4℃下避光存放。

试样制备与保存过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

7 测定步骤

7.1 提取

7.1.1 肌肉、肝脏、肾脏样品

称取5g试样(精确到0.01g)于50 mL具塞塑料离心管(5.9)中，加入0.1％甲酸-甲醇溶液(4.8)20 mL，均质2 min后，4℃下8 000 r/min离心10 min。转移上清液至另一离心管中，残渣中加入10 mL 0.1％甲酸-甲醇溶液((4.8)，重复以上提取操作。合并两次提取液，加入0.1％甲酸-甲醇溶液饱和正己烷(4.10)10 mL，涡旋振荡2 min, 4 000 r/min离心5 min，弃去上层液(正己烷层)，再加入正己烷(4.10)10 mL，重复以上脱脂操作，所得下层液待净化。

7.1.2 牛奶样品

称取牛奶样品5g(精确至0.01g)置于50 mL具塞塑料离心管(5.9)中，涡旋加入1 mL盐酸溶液(4.6) ,4℃下8 000 r/min离心10 min。转移上清液至另一离心管中，残渣中加入l 0mL0.1％甲酸-甲醇溶液(4.8)，涡旋振荡提取2 min。合并两次提取液，其余操作同7.1.1。

7.2 净化

Oasis HLB柱(4.15)使用前依次用6 mL甲醇和6 mL水预洗。将上述所得样品提取液过Oasis HLB柱，弃去流出液，加10 mL水淋洗，弃去流出液，减压抽干后加5 mL甲醇洗脱，收集全部洗脱液，50℃水浴氮气吹干，加1.0 mL 0.1％甲酸-甲醇溶液(4.9)溶解残渣，混匀，过0.45um滤膜(4.16)，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱-质谱/质谱条件

液相色谱-质谱/质谱条件如下：

a)色谱柱：C₁₈柱，150 mm×4.6 mm(内径)，5 um，或相当者；

b)流动相：0.1％的甲酸水溶液-乙腈，梯度见表1;

表1 梯度洗脱程序

c)流速：0. 8 mL/min;

d)进样量：10 uL;

e)离子源：电喷雾离子源；

f)扫描方式：正离子扫描；

g)检测方式：多反应监测；

h)雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气为高纯氮气，或其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求。

7.3.2 高效液相色谱-质谱/质谱测定

根据试样中被测样液的含量情况，选取待测物响应值在仪器线性响应范围内的浓度进行测定，如超出仪器线性响应范围应进行稀释。在上述色谱条件下粘杆菌素A、粘杆菌素B、杆菌肽A和维吉尼霉素M1的参考保留时间约分别为4.97 min，4.91 min，5.16 min和6.44 min。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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